[發明專利]一種基于MALDI-TOF/TOF和IRMS技術相結合進行大豆原產地溯源識別方法

有效

• 申請號: 202110346282.0
• 申請日: 2021-03-31
• 公開（公告）號: CN113406245B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 曾廣豐;丁博;李菊;侯穎燁;謝建軍;陳文銳;王志元;盧麗;董鐘
• 申請（專利權）人: 廣州海關技術中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 廣州圣理華知識產權代理有限公司 44302
• 代理人: 董覺非;張凱

1.一種基于MALDI-TOF/TOF和IRMS技術相結合進行大豆原產地溯源識別方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.標準樣品制備：選取具有明確地區的不同產地的大豆樣品，每個產地的所述大豆樣品分別經壓榨后得到標準大豆油樣品和經研磨后得到標準大豆粉樣品，并提取所述標準大豆粉樣品的水溶性蛋白質作為靶向目標物，所述大豆樣品來源于至少兩個不同產地；

S2.標準樣品的質譜數據和穩定同位素比值數據采集：?用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜儀分別采集不同產地的所述標準大豆油樣品的質譜數據信息，獲得所述標準大豆油樣品的高分辨質譜數據；以及用同位素質譜儀采集不同產地的所述標準大豆粉樣品的水溶性蛋白質的質譜數據信息，獲得所述水溶性蛋白質的穩定同位素比值數據；

S3.標準大豆油樣品靶向化合物的確定：將步驟S2獲得的高分辨質譜數據中的甘油三酯化合物質譜數據與脂類化合物數據庫中的標準甘油三酯化合物數據進行匹配，確定所述標準樣品的甘油三酯靶向化合物；

S4.大豆產地溯源鑒定模型建立：確定標準大豆油樣品中甘油三酯靶向化合物后，將甘油三酯靶向化合物對應的甘油三酯化合物高分辨質譜數據通過分析軟件進行歸一化和平均處理，將同一產地大豆的標準大豆油樣品歸一化和平均處理后的數據和標準大豆粉樣品的水溶性蛋白質的穩定同位素比值數據同時導入建模軟件進行主成分分析法、偏最小二乘法-判別分析法和正交偏最小二乘法回歸分析法中的一種或多種方式處理，然后依次將不同產地大豆的標準大豆油樣品歸一化和平均處理后的數據和標準大豆粉樣品的水溶性蛋白質的穩定同位素比值數據均導入建模軟件中，以獲得不同產地標準大豆油樣品中大豆油脂特征分布規律以及標準大豆粉樣品的水溶性蛋白質的穩定同位素分布規律，構建基于MALDI-TOF/TOF和穩定同位素比值分析相結合的大豆產地溯源鑒定模型；

S5.結果預測：將待檢測大豆樣品分別經過壓榨得到待檢測大豆油樣品和經研磨、提取后得到待檢測大豆水溶性蛋白質，通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜儀采集待檢測大豆油樣品的甘油三酯化合物高分辨質譜數據，以及用同位素質譜儀采集待檢測大豆水溶性蛋白質的穩定同位素比值數據；將待檢測大豆樣品的甘油三酯化合物高分辨質譜數據和穩定同位素比值數據同時導入步驟S4的所述大豆產地溯源鑒定模型中，進行待檢測大豆的產地溯源預測；

所述步驟S3的確定靶向化合物的方法包括：根據所述高分辨質譜數據中的目標物分子量范圍，將大豆油樣品中的高分辨質譜數據分為2個區域：分子量在800-1000的第一區域，分子量在700-800的第二區域，所述第一區域與第二區域是大豆油油脂代謝特征區域，將脂類化合物數據庫中的分子量范圍在700-950之間的動植物來源甘油三酯化合物與第一區域和第二區域中的大豆油甘油三酯化合物進行匹配篩選，確定分子量范圍在850-930?Da之間的64個大豆油中的甘油三酯化合物為甘油三酯靶向化合物；

所述步驟S4中還包括對大豆產地溯源鑒定模型的優化步驟，所述優化步驟包括：通過大豆產地溯源鑒定模型的VIP值確定所述甘油三酯靶向化合物中貢獻度大的部分甘油三酯化合物，選取38個甘油三酯化合物作為優選后的甘油三酯靶向化合物，在分子量范圍為850-930?Da之間的64個甘油三脂化合物中選取38個VIP值貢獻度大的甘油三脂化合物作為優選后的甘油三酯靶向化合物，甘油三酯靶向化合物的選擇過程中，還需要根據hotelling’s和DModx指標，刪除超出99%置信區間的異常值樣品，以及刪除在鑒定模型中出現數目少的所在地區的全部大豆油樣品，以優化大豆產地溯源鑒定模型；

步驟S1中標準大豆粉樣品的水溶性蛋白質提取過程如下：將大豆樣品研磨粉碎制備30?g標準大豆粉樣品，稱取1g標準大豆粉樣品，加入10?mL超純水，經過超聲波超聲30min，10000轉的轉動條件下離心5min，提取1mL上清蛋白質提取液加入3K超濾離心管，離心分別獲得分子量3k?Da以上的蛋白質，將離心后的蛋白質轉移至進樣瓶中，冷凍干燥8h以上至全部干燥，獲得水溶性蛋白質的固態蛋白質粉末。

2.根據權利要求1所述的大豆原產地溯源識別方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述標準大豆油樣品的高分辨質譜數據采集方法為：使用棉簽蘸取標準大豆油樣品印在含有基質的靶板上，所述基質為2，5-二羥基苯甲酸，每6個標準大豆油樣品使用聚乙二醇校準一次，每個標準大豆油樣品平行測定三次，將靶板置于所述基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜儀中用正離子模式進行質譜數據采集。