[發明專利]一種從甕棺土樣中提取羊毛角蛋白進行蛋白質組學檢測的方法

在審

• 申請號: 202110345115.4
• 申請日: 2021-03-31
• 公開（公告）號: CN112986582A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 王秉;周杰;鄭海玲;彭志勤;萬軍民
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 蔡鼎

本發明涉及文物檢測領域，本發明公開了一種從甕棺土樣中提取羊毛角蛋白進行蛋白質組學檢測的方法，本發明通過將免疫學與蛋白質組學結合，既可以充分提取樣品中的毛類蛋白質，又可以檢測出這些毛類蛋白質老化過程中的肽段損失。且操作方便，蛋白損傷性能小。

技術領域

本發明涉及文物檢測領域，尤其涉及一種從甕棺土樣中提取羊毛角蛋白進行蛋白質組學檢測的方法。

背景技術

中國紡織品文化由來已久，從已出土的紡織品文物殘片可以得知紡織品的歷史至少可以追溯到5500年，而毛作為一種獲取簡單，性能優異的纖維材料，在中國古代紡織品中有著不可替代的地位。中國最開始的農耕文明就開始對動物的訓化，在中國悠久的歷史里，動物毛的利用很可能可以追溯到更加古老的時代。羊作為新石器時代就被馴服的動物，羊毛無可厚非的成為了古代人們紡織品的主要原材料之一。

羊毛作為生物的一部分，其主要成分是蛋白質，而作為有機物的羊毛織物在長時間的埋藏過程中，各種微生物、酸、堿等的侵襲中難以完整保存下來，這為探索織物起源與發展帶來了非常大的挑戰。如何在織物宏觀特征消失的情況下確定它的存在，找到考古材料中存在的微乎其微的分子證據成為研究早期毛織物的關鍵。所以我們需要對僅存的蛋白質殘余進行富集，用于樣品需求更加微量的檢測手段。

目前檢測羊毛的方法有很多種，如電鏡，紅外，切片等，需要絲纖維保存較完整，所以需要一種更好的檢測方法對毛的存在的證據和毛的蛋白質姐妹分支進行表征，同時排除非毛蛋白質的干擾。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種從甕棺土樣中提取羊毛角蛋白進行蛋白質組學檢測的方法。本發明通過將免疫學與蛋白質組學結合，既可以充分提取樣品中的毛類蛋白質，又可以檢測出這些毛類蛋白質老化過程中的肽段損失。且操作方便，蛋白損傷性能小。

本發明的具體技術方案為：

一種從甕棺土樣中提取羊毛角蛋白進行蛋白質組學檢測的方法，包括以下步驟：

1）取500mg氨基化的磁性納米顆粒，加入到40-60mL PBS緩沖液中，超聲分散；加入150-250mL、20-30wt%戊二醛溶液，在30-40℃的振蕩水浴鍋中振蕩反應2-3小時。

2）磁性分離固液相，用PBS緩沖液清洗3-5遍，之后將活化后的磁性納米顆粒分散在40-60mL PBS緩沖液中，得到5-15mg/mL的磁性納米粒子溶液。

3）取30mL上述磁性納米粒子溶液，向其中加入含有20-55mg兔抗角蛋白單克隆抗體的BSA溶液，在30-40℃下振蕩反應1-3h。

本發明中抗體不局限于兔抗角蛋白抗體，加入羊毛中含有的其它蛋白質抗體合成多種單一免疫磁珠，可以提高蛋白質獲取豐度且不會降低特異性。

4）取100mg混有羊毛角蛋白的甕棺土樣溶解在碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液中，在50-80℃的震蕩水浴鍋中溶解2-3h后冷卻。

5）用PBS緩沖液洗滌步驟3）中所得的免疫磁珠，加入步驟4）中所得的甕棺土樣提取液，在30-40℃條件下震蕩孵育1-3h。

可以同時加入多種單一免疫磁珠共同提取，確保提取到所有想要的蛋白質結果，保證了提取蛋白質的準確性與完整性。

6）磁性分離，PBS緩沖液洗滌，除去雜質和上清液，得到羊毛角蛋白結合的免疫磁珠。