[發明專利]一種利用重組大腸桿菌全細胞催化合成L-蘋果酸的方法有效
| 申請號： | 202110338550.4 | 申請日： | 2021-03-30 |
| 公開（公告）號： | CN113061563B | 公開（公告）日： | 2023-03-24 |
| 發明（設計）人： | 尹龍飛;付永前;羅希;鄭偉龍;孫小龍 | 申請（專利權）人： | 臺州學院 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12P7/46;C12N9/88;C12R1/19 |
| 代理公司： | 重慶項乾光宇專利代理事務所(普通合伙) 50244 | 代理人： | 侯玉花 |
| 地址： | 318000 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 重組 大腸桿菌 細胞 催化 合成 蘋果酸 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種利用重組大腸桿菌全細胞催化合成L-蘋果酸的方法，其特征在于，具體如下：構建表達富馬酸酶基因的大腸桿菌工程菌，液體培養工程菌，離心收集濕菌體細胞，加入反應底物富馬酸鈉，待反應完全，收集反應液；所述富馬酸酶基因來自耐輻射球菌；所述反應溫度為35℃；所述反應時間為10h；所述反應pH為7；所述反應體系中，每10mL轉化合成體系中添加1g富馬酸鈉和0.1g濕菌體細胞；所述的反應體系中還添加有終濃度為50mmoL.L-1的Ca2+或/和終體積分數為0.03％～0.06％的烷基酚聚氧乙烯醚OP；
構建表達富馬酸酶基因的大腸桿菌工程菌的過程如下：設計引物DR2627up和DR2627dn，以耐輻射球菌的基因組DNA為模板進行PCR擴增；將PCR產物與T載體連接后轉化感受態細胞DH5α并進行篩選培養獲得陽性重組細胞；從陽性重組細胞中抽提質粒并進行酶切，并將酶切片段插入pET22b載體構建重組質粒pET22b-fumC，將重組質粒pET22b-fumC轉入感受態細胞BL21并進行篩選培養獲得重組富馬酸酶基因工程菌；所述的引物DR2627up和DR2627dn的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
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