[發明專利]兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法在審
| 申請號： | 202110337058.5 | 申請日： | 2021-03-26 |
| 公開（公告）號： | CN113046404A | 公開（公告）日： | 2021-06-29 |
| 發明（設計）人： | 馬媛媛;馬斯遠;汪振洋;魏曉珍;來慶英;洪解放;宋浩 | 申請（專利權）人： | 天津大學;中化健康產業發展有限公司 |
| 主分類號： | C12P19/56 | 分類號： | C12P19/56;C12P19/18 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385 | 代理人： | 沈忠華 |
| 地址： | 300073*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 兩步控溫 一鍋 生產 萊鮑迪苷 方法 | ||
1.一種兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，該方法使用能夠分泌表達糖基轉移酶的工程菌轉化萊鮑迪苷A成為萊鮑迪苷D，其特征在于包括如下步驟：
1)誘導培養階段：溫度在28℃-30℃的條件下，對所述工程菌進行誘導培養；
2)酶促反應階段：溫度在32℃-45℃的條件下，加入萊鮑迪苷A進行酶促反應。
2.根據權利要求1所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)酶促反應階段，溫度在35℃，進行反應。
3.根據權利要求1或2所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)酶促反應階段，一次性加入萊鮑迪苷A、尿苷二磷酸葡萄糖、氯化鎂，分批次加入甲醇進行反應。
4.根據權利要求3所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述酶促反應階段階段，每24小時加入甲醇。
5.根據權利要求1所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟1)誘導培養階段和所述步驟2)酶促反應階段在同一個BMMY培養基中進行。
6.根據權利要求1所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟1)誘導培養階段在BMMY培養基中培養，所述BMMY培養基中的PH為5.0-8.0，所述步驟1)誘導培養階段加入甲醇，所述甲醇濃度為0.5％-1.5％。
7.根據權利要求6所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述BMMY培養基的PH和所述步驟2)所選用溫度T的關系為：萊鮑迪苷A的轉化率＝-0.1537PH3+2.875PH2-17.311PH+O.000264T3-0.02793T2+1.02032T+22.68791。
8.根據權利要求1所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)酶促反應階段加入萊鮑迪苷A終濃度為1-60g/L，加入終濃度為1mM的尿苷二磷酸葡萄糖，加入終濃度為3mM的氯化鎂，每24小時加入終濃度為0.75％的甲醇。
9.根據權利要求1所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟1)轉換到步驟2)溫度需要提升，溫度提升速度為0.5-1℃/h。
10.根據權利要求1所述兩步控溫一鍋法生產萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)的溫度為42℃。
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