[發(fā)明專利]兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110337058.5
• 申請(qǐng)日: 2021-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN113046404A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬媛媛;馬斯遠(yuǎn);汪振洋;魏曉珍;來(lái)慶英;洪解放;宋浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué);中化健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/56
• 分類號(hào): C12P19/56;C12P19/18
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 沈忠華

1.一種兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，該方法使用能夠分泌表達(dá)糖基轉(zhuǎn)移酶的工程菌轉(zhuǎn)化萊鮑迪苷A成為萊鮑迪苷D，其特征在于包括如下步驟：

1)誘導(dǎo)培養(yǎng)階段：溫度在28℃-30℃的條件下，對(duì)所述工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；

2)酶促反應(yīng)階段：溫度在32℃-45℃的條件下，加入萊鮑迪苷A進(jìn)行酶促反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)酶促反應(yīng)階段，溫度在35℃，進(jìn)行反應(yīng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)酶促反應(yīng)階段，一次性加入萊鮑迪苷A、尿苷二磷酸葡萄糖、氯化鎂，分批次加入甲醇進(jìn)行反應(yīng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述酶促反應(yīng)階段階段，每24小時(shí)加入甲醇。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟1)誘導(dǎo)培養(yǎng)階段和所述步驟2)酶促反應(yīng)階段在同一個(gè)BMMY培養(yǎng)基中進(jìn)行。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟1)誘導(dǎo)培養(yǎng)階段在BMMY培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述BMMY培養(yǎng)基中的PH為5.0-8.0，所述步驟1)誘導(dǎo)培養(yǎng)階段加入甲醇，所述甲醇濃度為0.5％-1.5％。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述BMMY培養(yǎng)基的PH和所述步驟2)所選用溫度T的關(guān)系為：萊鮑迪苷A的轉(zhuǎn)化率＝-0.1537PH³+2.875PH²-17.311PH+O.000264T³-0.02793T²+1.02032T+22.68791。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)酶促反應(yīng)階段加入萊鮑迪苷A終濃度為1-60g/L，加入終濃度為1mM的尿苷二磷酸葡萄糖，加入終濃度為3mM的氯化鎂，每24小時(shí)加入終濃度為0.75％的甲醇。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟1)轉(zhuǎn)換到步驟2)溫度需要提升，溫度提升速度為0.5-1℃/h。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述兩步控溫一鍋法生產(chǎn)萊鮑迪苷D的方法，其特征在于：所述步驟2)的溫度為42℃。