[發明專利]一種用于滅菌效果監測的生物指示劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202110336247.0
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN113862170A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 王丹;巫明毫;饒雨露
• 申請（專利權）人: 成都醫學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/22;C12Q1/04;C12R1/07
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種用于芽孢萌發生長的培養基，其特征在于：它是由如下重量百分比的原料制備而成：

胰酪蛋白胨0.5～1.5％，腦心浸出液肉湯0.5～1.5％，果糖0.2～0.4％，葡萄糖0.1～0.3％，氯化鉀0.05～0.15％，磷酸鹽0.05～0.15％，，吐溫80 0.05～0.2％，丙氨酸0.3～0.7％，賴氨酸0.05～0.15％，纈氨酸0.05～0.15％，2,6-吡啶二羧酸0.17～0.25％，CaCl₂0.10～0.18％，氯化錳0.0005-0.0015％，4-甲基傘形酮酰-α-D-吡喃葡糖苷(4-MUG)0.01～0.03％，溴甲粉紫0.001～0.003％，其余為pH 7.4-7.8水溶液。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：它是由如下重量百分比的原料制備而成：

胰酪蛋白胨1％，腦心浸出液肉湯培養基1％，果糖0.3％，葡萄糖0.2％，氯化鉀0.1％，磷酸鹽0.1％，吐溫80 0.1％，丙氨酸0.5％，賴氨酸0.1％，纈氨酸0.1％，2,6-吡啶二羧酸0.21％，CaCl₂0.14％，氯化錳0.001％，4-甲基傘形酮酰-α-D-吡喃葡糖苷(4-MUG)0.02％，溴甲粉紫0.002％，其余為pH 7.4-7.8水溶液。

3.根據權利要求1或2所述的培養基，其特征在于：所述磷酸鹽為磷酸氫二鉀；所述丙氨酸為L-丙氨酸；所述賴氨酸為L-賴氨酸；所述纈氨酸為L-纈氨酸。

4.一種生物指示劑，其特征在于，它包括芽孢和權利要求1～3任意一項所述培養基；所述培養基與芽孢的體積菌落數配比為0.7mL：1×10⁵～1×10⁶CFU，優選0.7mL：1×10⁶CFU。

5.根據權利要求4所述的生物指示劑，其特征在于：所述芽孢為嗜熱脂肪芽孢桿菌Bacillus stearothermophilus的休眠體。

6.根據權利要求3或4所述的生物指示劑，其特征在于：所述芽孢附著在載體上；所述載體為紙片，規格為0.5～1×1～3cm，優選特衛強紙，規格為0.5×2cm。

7.一種權利要求1～3任意一項所述培養基的制備方法，其特征在于：它包括如下步驟：

(1)按權利要求1所述配比稱取原料；

(2)取4-MUG，用二甲亞砜溶解得4-MUG溶液；取L-丙氨酸、L-賴氨酸、L-纈氨酸，加配方量5％的蒸餾水溶解，得氨基酸溶液；取剩余原料，加配方量95％的蒸餾水溶解，調節pH值至7.4-7.8，滅菌，得培養基母液；

(3)將步驟2)氨基酸溶液與4-MUG溶液，混合，過濾除菌，再與步驟2)培養基母液混合，即得培養基。

8.權利要求4～6任意一項所述生物指示劑的制備方法，其特征在于：它包括以下步驟：

a、取芽孢，附著于載體上，得菌片；

b、將步驟a的菌片與權利要求1所述培養基分別置于同一生物指示劑容器中，即得。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：所述芽孢單面附著于載體上；所述載體為紙片，規格為0.5～1×1～3cm，優選，特衛強紙，規格0.5×2cm；所述培養基與芽孢的體積菌落數配比為0.7mL：1×10⁵～1×10⁶CFU，優選0.7mL：1×10⁶CFU；所述菌片附著有芽孢的一面朝向生物指示劑容器的管壁，并固定于生物指示劑容器中；所述芽孢為嗜熱脂肪芽孢桿菌Bacillus stearothermophilus的休眠體。

10.權利要求3～6任意一項所述的生物指示劑在制備監測生物滅菌效果的試劑中的用途；所述試劑是監測化學試劑滅菌、射線滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌和/或過濾除菌的試劑，優選監測濕熱滅菌的試劑，更優選監測蒸氣加壓滅菌。