[發(fā)明專利]一種用于滅菌效果監(jiān)測的生物指示劑及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110336247.0
• 申請(qǐng)日: 2021-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN113862170A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王丹;巫明毫;饒雨露
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12Q1/22;C12Q1/04;C12R1/07
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明公開了一種用于芽孢萌發(fā)生長的培養(yǎng)基和用該培養(yǎng)基制備的生物指示劑及他們相應(yīng)的制備方法。本發(fā)明通過特定的培養(yǎng)基，使芽孢萌發(fā)產(chǎn)酸時(shí)間更快，生物指示劑閱讀器檢測的響應(yīng)值更高，響應(yīng)時(shí)間更短，總體上使芽孢萌發(fā)檢測結(jié)果較目前市場成熟生物制劑更快，更準(zhǔn)確，具備推廣應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種用于滅菌效果監(jiān)測的生物指示劑及其制備方法。

背景技術(shù)

滅菌是指采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長繁殖能力的措施。滅菌常用的方法有化學(xué)試劑滅菌、射線滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌和過濾除菌等，滅菌的徹底程度受微生物對(duì)滅菌方式的抵抗力、滅菌時(shí)間與滅菌方式強(qiáng)度的制約。由于滅菌是獲得純培養(yǎng)的必要條件，現(xiàn)在很多行業(yè)領(lǐng)域，如食品工業(yè)、醫(yī)藥領(lǐng)域、農(nóng)業(yè)種植都會(huì)使用到滅菌技術(shù)，滅菌的效果直接關(guān)系到行業(yè)的質(zhì)量安全，生產(chǎn)效益。

生物指示劑是一類特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗(yàn)證，生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等。目前普遍使用的生物指示劑存在檢測時(shí)間長，降低了涉及滅菌工藝的行業(yè)工作效率。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種用于芽孢萌發(fā)生長的培養(yǎng)基，它是由如下重量百分比的原料制備而成：

胰酪蛋白胨0.5～1.5％，腦心浸出液肉湯0.5～1.5％，果糖0.2～0.4％，葡萄糖0.1～0.3％，氯化鉀0.05～0.15％，磷酸鹽0.05～0.15％，吐溫80 0.05～0.2％，丙氨酸0.3～0.7％，賴氨酸0.05～0.15％，纈氨酸0.05～0.15％，2,6-吡啶二羧酸0.17～0.25％，CaCl₂0.10～0.18％，氯化錳0.0005-0.0015％，4-甲基傘形酮酰-α-D-吡喃葡糖苷(4-MUG)0.01～0.03％，溴甲粉紫0.001～0.003％，其余為pH 7.4-7.8水溶液。

進(jìn)一步地，它是由如下重量百分比的原料制備而成：

胰酪蛋白胨1％，腦心浸出液肉湯培養(yǎng)基1％，果糖0.3％，葡萄糖0.2％，氯化鉀0.1％，磷酸鹽0.1％，吐溫80 0.1％，丙氨酸0.5％，賴氨酸0.1％，纈氨酸0.1％，2,6-吡啶二羧酸0.21％，CaCl₂0.14％，氯化錳0.001％，4-甲基傘形酮酰-α-D-吡喃葡糖苷(4-MUG)0.02％，溴甲粉紫0.002％，其余為pH 7.4-7.8水溶液。

更進(jìn)一步地，所述磷酸鹽為磷酸氫二鉀；所述丙氨酸為L-丙氨酸；所述賴氨酸為L-賴氨酸；所述纈氨酸為L-纈氨酸。

本發(fā)明還提供了一種生物指示劑，它包括芽孢和前述培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基與芽孢的體積菌落數(shù)配比為0.7mL：1×10⁵～1×10⁶CFU。

進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)基與芽孢的體積菌落數(shù)配比為0.7mL：1×10⁶CFU。

更進(jìn)一步地，所述芽孢為嗜熱脂肪芽孢桿菌Bacillus stearothermophilus的休眠體。

更進(jìn)一步地，所述芽孢附著在載體上；所述載體為紙片，規(guī)格為0.5～1×1～3cm。

更進(jìn)一步地，所述紙片為特衛(wèi)強(qiáng)紙，其規(guī)格為0.5×2cm。

本發(fā)明還提供了一種前述培養(yǎng)基的制備方法，它包括如下步驟：

(1)按配比稱取原料；

(2)取4-MUG，用二甲亞砜溶解得4-MUG溶液；取L-丙氨酸、L-賴氨酸、L-纈氨酸，加配方量5％的水溶解，得氨基酸溶液；取剩余原料，加配方量95％的水溶解，調(diào)節(jié)pH值至7.4-7.8，滅菌，得培養(yǎng)基母液；

(3)將步驟2)氨基酸溶液與4-MUG溶液，混合，過濾除菌，再與步驟2)培養(yǎng)基母液混合，即得培養(yǎng)基。