[發(fā)明專利]一種新型CCK8細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110333184.3
• 申請(qǐng)日: 2021-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN113122607B
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝素瑤;朱宇;陳澤新;黃敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 創(chuàng)芯國(guó)際生物科技（廣州）有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/02
• 分類號(hào): C12Q1/02;C12Q1/32
• 代理公司: 廣州容大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年

本發(fā)明提供一種CCK8檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用，所述CCK8檢測(cè)試劑盒包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下終濃度的組分：透明質(zhì)酸酶0.5?1mg/mL，EDTA 0.1?0.5mg/mL，鹽酸0.02?0.05mol/L；所述添加因子二包括以下終濃度的組分：wst?8 0.08?0.2mg/mL，1?Methoxy PMS0.05?0.3mg/mL，鈣鹽0.1?0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶劑均為無菌水。該試劑盒應(yīng)用在類器官藥敏活力檢測(cè)中，反應(yīng)時(shí)間短，準(zhǔn)確性和重復(fù)性方面優(yōu)于一般的CCK8藥敏檢測(cè)方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種CCK8檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

CCK8法是一種常見的檢測(cè)方法，其檢測(cè)原理為活細(xì)胞中的琥珀酸脫氫酶與WST–8進(jìn)行反應(yīng)生成黃色甲臜產(chǎn)物，它是一種高度水溶性黃色甲臜染料，黃色甲臜染料的數(shù)量與活細(xì)胞成正比，因此可以反映活細(xì)胞數(shù)量。

一般的CCK8檢測(cè)試劑盒只能作用于2D細(xì)胞，可以實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，且穩(wěn)定準(zhǔn)確，但是在3D類器官上卻表現(xiàn)出反應(yīng)不完全，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)等現(xiàn)象，且藥敏結(jié)果也呈現(xiàn)重復(fù)性及穩(wěn)定性較差的情況，因此，亟待開發(fā)一種可以用于類器官的CCK8藥敏檢測(cè)試劑盒，以實(shí)現(xiàn)類器官藥敏活力的快速、穩(wěn)定、準(zhǔn)確地檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明旨在提供一種CCK8檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用以解決上述問題。本發(fā)明的技術(shù)方案為：

第一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種CCK8檢測(cè)試劑盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下終濃度的組分：透明質(zhì)酸酶0.5-1mg/mL，EDTA0.1-0.5mg/mL，鹽酸0.02-0.05mol/L；所述添加因子二包括以下終濃度的組分：wst-8 0.08-0.2mg/mL，1-Methoxy PMS0.05-0.3mg/mL，鈣鹽0.1-0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶劑均為無菌水。

進(jìn)一步地，所述添加因子一的制備及保存方法為：按照組分的終濃度配料，將透明質(zhì)酸酶、EDTA和鹽酸混合均勻并溶解后，0.22μm濾膜過濾，于-20℃保存。

進(jìn)一步地，所述添加因子二的制備及保存方法為：按照組分的終濃度配料，將wst-8、1-Methoxy PMS、鈣鹽和無菌水混合均勻并溶解后，0.22μm濾膜過濾，于-20℃保存。

進(jìn)一步地，所述鈣鹽包括氯化鈣、硝酸鈣、硫酸鈣、磷酸鈣中的至少一種。

優(yōu)選地，所述鈣鹽為氯化鈣。

第二個(gè)方面，本發(fā)明提供上述CCK8檢測(cè)試劑盒在類器官藥敏活力檢測(cè)中的應(yīng)用。

第三個(gè)方面，本發(fā)明提供一種類器官藥敏活力檢測(cè)方法，包括：

(1)將類器官樣本接種于孔板中，培養(yǎng)48-72h后進(jìn)行藥物接觸；

(2)加藥96h后在孔板中加入添加因子一繼續(xù)培養(yǎng)20～30min；

(3)繼續(xù)在孔板中加入添加因子二培養(yǎng)2-4h，于450nm進(jìn)行活力檢測(cè)。

本發(fā)明提供了一種新的CCK8檢測(cè)試劑盒及藥敏檢測(cè)方法，與傳統(tǒng)CCK8檢測(cè)方法相比，具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：。

1、本發(fā)明在類器官藥敏實(shí)驗(yàn)上的反應(yīng)時(shí)間短，更快速。

2、本發(fā)明在類器官藥敏實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性方面優(yōu)于一般的CCK8藥敏檢測(cè)方法。

3、本發(fā)明在類器官藥敏實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性方面優(yōu)于一般的CCK8藥敏檢測(cè)方法。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例6的人肺癌類器官細(xì)胞活力隨來那替尼藥物濃度變化的曲線圖。