[發(fā)明專利]一種siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110332771.0
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN113244172B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王琴梅
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/36;A61K31/704;A61K47/64;A61K48/00;A61P35/00;C08G81/00
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 李海波;劉艷麗

本發(fā)明公開了一種siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)及其制備方法，其采用腫瘤靶向穿膜肽iRGD對NPs進行靶向修飾，再負載化療藥物鹽酸阿霉素、血管內(nèi)皮生長因子的siRNA，構(gòu)建腫瘤治療體系DOX/siVEGF/iRGD?NPs，該體系具有較低的細胞毒性，通過DOX、siVEGF、iRGD和NPs四者協(xié)同作用獲得主動靶向抑制腫瘤細胞MCF?7、新生血管及靶向穿透腫瘤球的能力，預(yù)計在腫瘤的靶向治療上具有潛在應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤細胞靶向抑制技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤因其較高的發(fā)病率及致死率成為世界三大疾病之一，嚴重威脅著人類的生命健康。近年來，聯(lián)合化學(xué)治療與基因治療用于腫瘤治療成為了國內(nèi)外的研究熱點。化學(xué)治療作為腫瘤治療最主要的方法之一，可用于治療多種類型的腫瘤，但由于安全劑量范圍內(nèi)的藥物并不能完全根除腫瘤，過量非特異選擇性的藥物在體內(nèi)累積，引起嚴重的毒副作用。治療基因的加入可以減少化療藥物的劑量，從而降低藥物引起的毒副作用，同時避免腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性，而化療藥物的使用可以有效提高基因在細胞中的表達，增強治療基因的治療效果。

因此，聯(lián)合化學(xué)治療與基因治療可以達到降低毒副作用，提高腫瘤治療效果的目的。但聯(lián)合化學(xué)治療與基因治療面臨一個巨大的挑戰(zhàn)，即合成安全高效且特異性強的納米載體。聚合物形成的納米囊泡因其獨特的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)，得到廣泛的使用。通過在納米載體表面進行靶向修飾的主動靶向作用，使其能特異性靶向至腫瘤部位，提高腫瘤細胞對納米載體的攝取。相比于正常組織，腫瘤組織通常會過度表達某些受體或抗原，而納米載體表面的靶向配體通過與腫瘤組織表面的受體/抗原特異性結(jié)合，實現(xiàn)靶向遞送。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)的制備方法，該方法工藝簡單、易于控制。

本發(fā)明的目的還在于提供采用上述制備方法制備的siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)。

本發(fā)明的最后一個目的在于提供上述siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)在制備具有腫瘤細胞靶向抑制能力、靶向穿透能力和體內(nèi)抑制血管生成能力功效的藥物中的應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述第一個目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種siRNA和抗癌藥靶向共遞送系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟：

(1)脂多糖胺納米囊泡(NPs)的制備

通過酰胺化反應(yīng)將膽固醇氯甲酸酯(cholesteryl，Cho)引入聚乙烯亞胺(PEI)，得到膽固醇封端的聚乙烯亞胺(PEI-Cho)；

通過高碘酸鈉氧化反應(yīng)制備得到多醛基氧化海藻酸鈉(Oxidized?alginate,OA)；

通過Schiff堿反應(yīng)將多醛基氧化海藻酸鈉(MASA)引入膽固醇封端的聚乙烯亞胺(PEI-Cho)，并通過還原化合物中的亞胺鍵和醛基得到脂多糖胺(lipopolysaccharide-amine，LPSA)納米囊泡(NPs)；

(2)納米囊泡包裹鹽酸阿霉素(DOX/NPs)的制備

配制鹽酸阿霉素(DOX)/PBS溶液，隨后加入步驟(1)中制備的脂多糖胺納米囊泡(NPs)，在磁力攪拌下先進行超聲處理，再繼續(xù)攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后離心，制得納米囊泡包裹鹽酸阿霉素(DOX/NPs)溶液；

(3)siRNA/DOX-NPs的制備

將FAM-siRNA粉末溶于無核酶水制成FAM-siRNA溶液，與納米囊泡包裹鹽酸阿霉素(DOX/NPs)溶液混合，室溫下靜置后，離心，除去未被包裹的FAM-siRNA，獲得siRNA/DOX-NPs；

(4)DOX/siRNA/iRGD-NPs的制備