[發明專利]一種識別絲織品的桑蠶單克隆抗體的膠體金標記方法

在審

• 申請號: 202110331517.9
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN112986566A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 王秉;閆琳;馬維維;彭志勤;萬軍民
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 蔡鼎

本發明涉及文物檢測領域，公開了一種識別絲織品的桑蠶單克隆抗體的膠體金標記方法，包括：1）取超聲后分散均勻的膠體金8?12ml，調節pH為8.0~9.0；2）取桑蠶單克隆抗體用PBS緩沖液稀釋；3）將膠體金滴加至桑蠶單克隆抗體溶液中攪拌；4）添加BSA進行蛋白的封閉，攪拌；5）添加PEG?20000，攪拌；6）將標記好的膠體金離心，棄上清液；7）沉淀物用含BSA、疊氮鈉的PBS溶液重懸，做防腐處理，冷藏備用。本發明方法能有效解決膠體金在標記過程中因為結合比濃度問題導致死金沉淀的問題。

技術領域

本發明涉及文物檢測領域，尤其涉及一種識別絲織品的桑蠶單克隆抗體的膠體金標記方法。

背景技術

絲綢，是古代中華文明的重要組成部分，為后世傳達著各個歷史階段重要的政治、經濟和文化信息。中國自古以來就是絲綢之國，中國的絲織品聞名世界。近年來，越來越多的絲織品被發掘出土，對這些絲織品文物進行分析鑒定，可為追溯絲綢的起源和傳播提供重要信息。而通過膠體金免疫層析技術可以在考古現場對文物進行快速檢測，具有廣闊的應用前景。

由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，故稱膠體金。膠體金具有高電子密度，能與多種生物大分子結合，已成為繼熒光素、放射性同位素和酶之后，在免疫標記技術中較常用的一種非放射性示蹤劑。膠體金的粒徑一般在1~100nm之間，能夠均勻、穩定地分散在液體中，呈球形小顆粒或橢圓形大顆粒。膠體金顆粒最外層可以吸附大量的正離子，能夠均勻分散在溶液中。由于膠體金表面呈負電性，能夠與表面帶正電荷的抗原、抗體通過靜電作用進行標記。但是不同的抗體的最適pH以及標記濃度都不同，在結合過程中操作不當膠體金會有死金沉淀標記不完全等現象。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種識別絲織品的桑蠶單克隆抗體的膠體金標記方法，本發明方法能有效解決膠體金在標記過程中因為結合比濃度問題導致死金沉淀的問題。

本發明的具體技術方案為：一種識別絲織品的桑蠶單克隆抗體的膠體金標記方法，包括以下步驟：

1）取超聲后分散均勻的膠體金8-12ml，加入碳酸鉀溶液調節pH為8.0~9.0；

加入碳酸鉀調節pH至桑蠶單克隆抗體與膠體金結合的最佳pH，增加結合成功率。

2）取桑蠶單克隆抗體用pH=8的PBS緩沖液稀釋至濃度為10~20ug/ml；

3）將步驟1）所得膠體金以25-35滴/min的速度滴加至步驟2）所得桑蠶單克隆抗體溶液中，室溫勻速攪拌45~60min；

將調好pH的膠體金以上述速度滴加進稀釋后的桑蠶單克隆抗體溶液中，可有效防止膠體金在標記過程中濃度過高發生死金沉淀等現象。

4）向步驟3）所得溶液中添加BSA至其終濃度為0.3-0.5wt%，進行蛋白的封閉，繼續攪拌8-12min；

BSA作為保護穩定劑，增加桑蠶單克隆抗體與膠體金結合的穩定性。

5）向步驟4）所得溶液中添加PEG-20000至其終濃度為0.15-0.25wt%，繼續攪拌8-12min；

PEG-20000可以有效的抑制納米粒子的聚集，進而使得納米粒子可以很好的分散開。

6）將步驟5）所得標記好的膠體金在12000~15000rpm下離心15~30min，棄上清液；