[發明專利]三七姜乙酸乙酯部位的指紋圖譜和質量分析方法

有效

• 申請號: 202110331139.4
• 申請日: 2021-03-26
• 公開（公告）號: CN113063872B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 梁潔;徐遠鴻;曹玉嬪;柳賢福;孫正伊;趙立春
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 南寧啟創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45122
• 代理人: 謝美萱

1.三七姜乙酸乙酯部位的指紋圖譜，其特征在于，是采用如下方法構建的：

(1)供試品溶液的制備：

①制備三七姜乙醇提取物：稱取三七姜粗粉，粉碎后過16目篩，加入其7-8倍體積量的80％乙醇溶液，加熱回流提取2h，重復3次，濾過并收集濾液，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得到乙醇總提取物；

②提取乙酸乙酯部位：將所述乙醇總提取物用純水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取至溶液顏色至澄清透明，得到乙酸乙酯萃取部位的藥液，減壓濃縮，放置水浴蒸干，即得到乙酸乙酯部位提取物，備用；

③制備供試品溶液：取乙酸乙酯部位提取物0.1g，精密稱定，用5mL甲醇超聲提取5min，加甲醇定容至10mL，過濾，將所述濾液13000r/min離心10min，取上清液，過0.22μm微孔濾膜，即得供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：各稱取對羥基苯甲酸、原兒茶酸、對羥基苯甲醛對照品，分別加甲醇溶解制備質量濃度分別為0.212、0.236、0.149mg/mL的混合對照品溶液；

(3)采用高效液相色譜法分析上述供試品溶液和對照品溶液，按照如下色譜條件進行色譜圖采集，采用液相工作站對色譜圖處理，再導入至中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件中，得到對指紋圖譜；所述色譜條件為：進樣量10μL；以乙腈為流動相B，0.1％磷酸溶液或0.1％甲酸溶液或0.1％冰醋酸溶液為流動相A，進行梯度洗脫:0min→20min、10％→60％B，20min→50min、60％→80％B，50min→65min、80％→100％B，65min→75min、100％B，流速：0.8～1.2mL/min，柱溫30℃，檢測波長260nm。

2.根據權利要求1所述三七姜乙酸乙酯部位的指紋圖譜，其特征在于，所述色譜柱為規格為4.6×250mm、5μm的C₁₈鍵合硅膠柱。

3.根據權利要求1所述三七姜乙酸乙酯部位的指紋圖譜，其特征在于，所述指紋圖譜標定18個色譜峰為共有指紋峰，2號峰為對羥基苯甲酸峰。

4.如權利要求1-3所述三七姜乙酸乙酯部位指紋圖譜的質量分析，其特征在于，是利用三七姜乙酸乙酯部位的指紋圖譜與鎮痛抗炎建立譜效關系，并基于所述譜效關系建立三七姜質量評價標準。

5.根據權利要求4所述三七姜乙酸乙酯部位指紋圖譜的質量分析，其特征在于，所述三七姜乙酸乙酯部位的指紋圖譜與鎮痛抗炎建立譜效關系，是利用Pearson相關系數法和灰色關聯度法共同建立；所述三七姜鎮痛抗炎的研究包括耳廓腫脹度，扭體次數研究。

6.根據權利要求5所述三七姜乙酸乙酯部位指紋圖譜的質量分析，其特征在于，所述灰色關聯度分析法為：將鎮痛抗炎試驗中三七姜乙酸乙酯部位提取物對機體各藥效指標抑制率設置為參考系列耳廓腫脹度實驗為λ₀₁、扭體次數實驗為λ₀₂，將不同供試品三七姜指紋圖譜18個共有峰峰面積設置為比較數列，記為λ_i，i＝1，2，3…18，計算λ₀₁、λ₀₂與λ_i(k)的關聯度，并對關聯度大小進行排序以判別各峰面積對藥效指標的影響力。

7.根據權利要求5所述三七姜乙酸乙酯部位指紋圖譜的質量分析，其特征在于，所述Pearson相關系數分析法為：將不同供試品三七姜指紋圖譜18個共有峰值的峰面積為自變量，依次用α₁-α₁₈表示；所述耳廓腫脹度β₁、扭體次數β₂為因變量，采用SPSS23.0統計軟件，得到指紋圖譜中各色譜峰與藥效的Pearson相關系數。

8.根據權利要求5所述三七姜乙酸乙酯部位指紋圖譜的質量分析，其特征在于，所述三七姜質量評價標準是：選擇灰色關聯度分析中關聯度大于0.65，且Pearson相關系數法分析中對三七姜鎮痛、抗炎藥效的相關呈負相關的指紋峰為特征峰，通過計算所選擇特征峰占總峰面積的比例來制定三七姜質量評價標準。