[發(fā)明專利]基于飛行時(shí)間質(zhì)譜平臺(tái)的rooptag不對(duì)稱多重PCR檢測(cè)心血管疾病用藥基因的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110329214.3
• 申請(qǐng)日: 2021-03-27
• 公開（公告）號(hào): CN112813161A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宗飛;潘韻芝;朱國(guó)強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州安未生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公布了核酸質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)心血管疾病用藥相關(guān)基因的核酸組合物、試劑盒和檢測(cè)方法，涉及一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒及檢測(cè)方法，試劑盒包括11種基因17個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)試劑，針對(duì)11種基因出現(xiàn)的異常的基因變異位點(diǎn)，設(shè)計(jì)每個(gè)位點(diǎn)的帶Roop結(jié)構(gòu)的擴(kuò)增引物，無需繁瑣的單堿基延伸及后續(xù)純化等處理步驟，可以快速地完成上機(jī)前的樣本預(yù)處理流程，進(jìn)而進(jìn)行質(zhì)譜分析其特異性的產(chǎn)物，判定每一個(gè)位點(diǎn)的基因型，其檢測(cè)特異性強(qiáng)、靈敏度高，可應(yīng)用于科研、藥物療效研究、心血管疾病相關(guān)調(diào)查、以及心血管臨床用藥指導(dǎo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于飛行時(shí)間質(zhì)譜基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒，具體涉及人類樣本中心血管疾病用藥相關(guān)的11種基因17個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)。針對(duì)11種基因出現(xiàn)的異常的基因變異位點(diǎn)，設(shè)計(jì)每個(gè)位點(diǎn)的rooptag引物引物組合，通過不對(duì)稱多重PCR，進(jìn)而進(jìn)行質(zhì)譜分析其特異性的產(chǎn)物，判定每一個(gè)位點(diǎn)的基因型。本發(fā)明及應(yīng)用涉及的技術(shù)領(lǐng)域是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和核酸質(zhì)譜技術(shù)。

背景技術(shù)

心血管疾病是全球人類健康的首要疾病負(fù)擔(dān)，心血管疾病嚴(yán)重威脅著中國(guó)人的健康，我國(guó)心血管病的發(fā)病率和死亡率呈快速上升趨勢(shì)，具有患者基數(shù)大，死亡率高的特點(diǎn)。根據(jù)《中國(guó)心血管病報(bào)告2019》數(shù)據(jù)，心血管病現(xiàn)患人數(shù)3.30億，其中腦卒中1300萬，冠心病1100萬，肺原性心臟病500萬，心力衰竭890萬，風(fēng)濕性心臟病250萬，先天性心臟病200萬，下肢動(dòng)脈疾病4530萬，高血壓2.45億。農(nóng)村和城市心血管病分別占死因的45.91%和43.56%。

隨著基因檢測(cè)技術(shù)的普及，臨床用藥經(jīng)逐漸發(fā)展為個(gè)性化用藥階段。藥物基因組學(xué)正是通過研究不同基因型對(duì)藥物藥效和毒性的不同反應(yīng)，進(jìn)而為攜帶不同基因型的個(gè)體臨床用藥提供差異化指導(dǎo)。通過精準(zhǔn)用藥指導(dǎo)，可以降低患者不良心血管事件發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，以期達(dá)到“精準(zhǔn)醫(yī)療”、“個(gè)性化用藥”、“合理用藥”的目標(biāo)。

高血壓和心血管疾病是復(fù)雜疾病，由多個(gè)微效基因與環(huán)境因素長(zhǎng)期相互作用所致。鑒定出與高血壓和/或血壓升高相關(guān)的易感基因和/或致病基因，在人群中篩選增加疾病風(fēng)險(xiǎn)的易感基因確定易感個(gè)體，將有助于高血壓和心血管疾病事件(冠心病和腦卒中)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)、新藥開發(fā)、診斷和個(gè)體化治療。

基因檢測(cè)是診斷醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)研究的重要工具在諸如以下方面起到重要的作用：病原體如真菌，細(xì)菌和病毒檢測(cè)，遺傳病篩查，疾病精準(zhǔn)用藥，腫瘤篩查，法醫(yī)鑒定等各個(gè)領(lǐng)域。

國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委印發(fā)的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目目錄2013年版》中“五、臨床分子生物學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢目錄下用藥指導(dǎo)的分子生物學(xué)檢驗(yàn)”推薦進(jìn)行CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1(1165GC)、AGTR1(1166AC)、ACE(I/D)、CYP2C19、CYP2C9、VKORC1、MTHFR(C677T)以及APOE基因檢測(cè)。

目前藥物用藥相關(guān)基因檢測(cè)產(chǎn)品已有獲批，考慮到臨床上心血管疾病多伴有其他并發(fā)癥，患者常有多藥物聯(lián)用的情況，但由于藥物間的相互作用、患者自身情況等多方面因素的影響，易導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生。所以針對(duì)心血管常用藥，基因檢測(cè)能更有效地指導(dǎo)患者用藥。

基因檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)主要包括：Taqman 探針法、Sanger測(cè)序法、飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）分型、HRM（高分辨率熔解曲線）、雜交法、高通量測(cè)序等技術(shù)平臺(tái)。其中，基于時(shí)間飛行質(zhì)譜（MALDI-TOF）完成的核酸檢測(cè)比如SNP檢測(cè)準(zhǔn)確率可達(dá)99.9%，除了準(zhǔn)確性高、靈活性強(qiáng)、通量大、檢測(cè)周期短等優(yōu)勢(shì)外，最有吸引力的應(yīng)該還是它的性價(jià)比。以SNP為例，飛行時(shí)間質(zhì)譜平臺(tái)（MALDI-TOF）是國(guó)際通用的基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）的研究平臺(tái)，該方法憑借其科學(xué)性和準(zhǔn)確性已經(jīng)成為該領(lǐng)域的新標(biāo)準(zhǔn)。