[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110329179.5
• 申請日: 2021-03-27
• 公開（公告）號: CN113061174A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設計）人: 徐仲杰;羅勇;王浩然;戴春華;孫雯;鐘佳琪;白少飛
• 申請（專利權）人: 上?；ぱ芯吭河邢薰?/a>
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;C07B59/00
• 代理公司: 上?？剖⒅R產(chǎn)權代理有限公司 31225
• 代理人: 吳文濱

本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定同位素氘標記β?乳球蛋白特征肽段及其制備方法，肽段的分子結構式為HO?Lys?Asn?Glu?Asn?Leu?Ala?Asp?Ile?NH₂，其中穩(wěn)定同位素氘標記的氨基酸為Lys?D₈、Leu?D₆或Ile?D₈的一種或更多種；制備時，采用固相合成多肽方法，以wang樹脂及Fmoc保護的穩(wěn)定同位素氘標記或非標記賴氨酸Fmoc?Lys(Boc)?OH為起始原料，在縮合劑的作用下偶合反應得到wang?Lys(Boc)?NH₂，之后依次與三肽OH?Asn?Glu(OtBU)?Asn?Fmoc、亮氨酸Fmoc?Leu?OH、二肽OH?Ala?Asp?Fmoc、異亮氨酸Fmoc?Ile?OH在縮合劑的作用下進行偶合反應，再經(jīng)后處理即可。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明既能夠有效地對β?乳球蛋白特征肽段IDALNENK進行標記，滿足檢測過程中特征離子碎片的需求，又提高了貴重氘標記氨基酸試劑的原子利用率，降低了生產(chǎn)成本，且有效地提高反應收率及合成效率。

技術領域

本發(fā)明屬于同位素標記多肽技術領域，涉及一種穩(wěn)定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段及其制備方法。

背景技術

β-乳球蛋白對小牛具有類似免疫球蛋白的功能，但對于嬰兒來說卻是主要的過敏原，容易造成嬰兒的過敏(嬰兒的消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，β-乳球蛋白較容易“整顆”被吸收，而被免疫系統(tǒng)判斷為病原)。因此，對食品中的β-乳球蛋白進行檢測非常重要。

目前，對于β-乳球蛋白檢測的方法主要有免疫分析法、PCR法以及儀器分析法，但是，食品中的基質效應以及不科學的前處理方法會對分析結果造成較大偏差。同位素稀釋質譜法IDMS(Isotope Dilution Mass Spectrometry)采用與待測物具有相同分子結構的穩(wěn)定同位素(²H、¹³C、¹⁵N)標記的有機物作為內標，利用質譜測定混合后樣品中內標和待測物的摩爾離子數(shù)之比，很少受到各種物理和化學因素的干擾，能夠有效消除基質效應和前處理等因素對分析結果的影響。目前，發(fā)達國家對于食品中過敏原β-乳球蛋白一般采用同位素稀釋質譜法進行檢測。

然而，β-乳球蛋白特征肽段內標試劑目前仍完全依賴進口，價格昂貴，嚴重限制了其在食品安全和檢驗檢疫等領域的應用。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段及其制備方法。本發(fā)明依據(jù)分子設計原理，利用固相合成多肽方法，以wang樹脂和Fmoc保護的穩(wěn)定同位素氘標記或非標記賴氨酸(Lys-Boc)為起始原料，在縮合劑的作用下，依次與其他的穩(wěn)定同位素氘標記或非標記氨基酸或短肽進行反應，最終生成穩(wěn)定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段IDALNENK，該工藝路線簡單、反應迅速、易于制備。產(chǎn)品經(jīng)簡單分離提純后，化學純度達99％以上，同位素豐度在99％以上，可充分滿足食品中過敏原β-乳球蛋白的檢測需要。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn)：

一種穩(wěn)定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段，該肽段的分子結構式為HO-Lys-Asn-Glu-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂，其中穩(wěn)定同位素氘標記的氨基酸為Lys-D₈、Leu-D₆或Ile-D₈的一種或更多種；分子結構式中，Lys為賴氨酸，Asn為天冬酰胺，Glu為谷氨酸，Leu為亮氨酸，Ala為丙氨酸，Asp為天冬氨酸，Ile為異亮氨酸。