[發明專利]一種穩定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段及其制備方法

在審

• 申請號: 202110329179.5
• 申請日: 2021-03-27
• 公開（公告）號: CN113061174A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 徐仲杰;羅勇;王浩然;戴春華;孫雯;鐘佳琪;白少飛
• 申請（專利權）人: 上海化工研究院有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;C07B59/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 吳文濱

1.一種穩定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段，其特征在于，該肽段的分子結構式為HO-Lys-Asn-Glu-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂，其中穩定同位素氘標記的氨基酸為Lys-D₈、Leu-D₆或Ile-D₈的一種或更多種；分子結構式中，Lys為賴氨酸，Asn為天冬酰胺，Glu為谷氨酸，Leu為亮氨酸，Ala為丙氨酸，Asp為天冬氨酸，Ile為異亮氨酸。

2.一種如權利要求1所述的穩定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段的制備方法，其特征在于，采用固相合成多肽方法，以wang樹脂及Fmoc保護的穩定同位素氘標記或非標記賴氨酸Fmoc-Lys(Boc)-OH為起始原料，在縮合劑的作用下偶合反應得到wang-Lys(Boc)-NH₂，之后依次與Fmoc保護的三肽OH-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Fmoc、Fmoc保護的穩定同位素氘標記或非標記亮氨酸Fmoc-Leu-OH、Fmoc保護的二肽OH-Ala-Asp-Fmoc、Fmoc保護的穩定同位素氘標記或非標記異亮氨酸Fmoc-Ile-OH在縮合劑的作用下進行偶合反應，得到wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂，經后處理得到HO-Lys-Asn-Glu-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂，即為穩定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段IDALNENK。

3.根據權利要求2所述的一種穩定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1)以wang樹脂及Fmoc保護的穩定同位素氘標記或非標記賴氨酸Fmoc-Lys(Boc)-OH為起始原料，在縮合劑的作用下進行偶合反應，之后脫掉保護基Fmoc，得到wang-Lys(Boc)-NH₂；

2)將wang-Lys(Boc)-NH₂及Fmoc保護的三肽OH-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Fmoc在縮合劑的作用下進行偶合反應，之后脫掉保護基Fmoc，得到wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-NH₂；

3)將wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-NH₂及Fmoc保護的穩定同位素氘標記或非標記亮氨酸Fmoc-Leu-OH在縮合劑的作用下進行偶合反應，之后脫掉保護基Fmoc，得到wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-NH₂；

4)將wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-NH₂及Fmoc保護的二肽OH-Ala-Asp-Fmoc在縮合劑的作用下進行偶合反應，之后脫掉保護基Fmoc，得到wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-Ala-Asp-NH₂；

5)將wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-Ala-Asp-NH₂及Fmoc保護的穩定同位素氘標記或非標記異亮氨酸Fmoc-Ile-OH在縮合劑的作用下進行偶合反應，之后脫掉保護基Fmoc，得到wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂；

6)將wang-Lys(Boc)-Asn-Glu(OtBU)-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂在切割液的作用下從wang樹脂上切割下來，后經洗滌、除溶、析晶后得到HO-Lys-Asn-Glu-Asn-Leu-Ala-Asp-Ile-NH₂，即為穩定同位素氘標記β-乳球蛋白特征肽段IDALNENK。