[發(fā)明專利]高效分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C68及利用生物反應(yīng)器對(duì)其進(jìn)行生產(chǎn)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110329027.5
• 申請(qǐng)日: 2021-03-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112852749A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任德強(qiáng);張健;宋新剛;葉陽(yáng);張立恒;孫博;麻昌姣;朱傳海;蔣艷茹;韓雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/08;C12R1/91
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 李智慧

1.一種高效分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C68，保藏編號(hào)為：CGMCCNo.21903。

2.一種利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)高效分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C68的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：

步驟一、通過(guò)有限稀釋法對(duì)犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行亞克?。?/p>

步驟二、通過(guò)血凝抑制方法檢測(cè)經(jīng)亞克隆所得到的不同細(xì)胞株的效價(jià)，篩選出效價(jià)最高的細(xì)胞株C68；

步驟三、將細(xì)胞株C68在生物反應(yīng)器中進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)或批次培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)高效分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C68的方法，其特征在于所述步驟三中，連續(xù)培養(yǎng)條件為：溫度為37℃，攪拌轉(zhuǎn)速為70rpm，溶氧為40%，pH為6.85。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)高效分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C68的方法，其特征在于所述步驟三中，批次培養(yǎng)條件為：溫度為37℃，攪拌轉(zhuǎn)速為70rpm，溶氧為40%，pH為6.85。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物反應(yīng)器生產(chǎn)高效分泌犬細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C68的方法，其特征在于所述步驟三中，連續(xù)培養(yǎng)和批次培養(yǎng)均包括細(xì)胞生長(zhǎng)階段和抗體分泌階段兩個(gè)階段，具體培養(yǎng)要求如下：

連續(xù)培養(yǎng)：種細(xì)胞在反應(yīng)器中培養(yǎng)24小時(shí)后，細(xì)胞密度為2.5*106個(gè)/ml時(shí)，開(kāi)始進(jìn)行流加培養(yǎng)，每24小時(shí)流進(jìn)200ml流加培養(yǎng)基，每日從反應(yīng)器內(nèi)取樣檢測(cè)細(xì)胞密度、成活率并通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)到1:2560時(shí)，開(kāi)始收獲細(xì)胞懸液，此時(shí)開(kāi)啟反應(yīng)器的出液管道，將流速設(shè)置為每24小時(shí)收獲2L，同時(shí)進(jìn)行同流速補(bǔ)液；

批次培養(yǎng)：種細(xì)胞在反應(yīng)器中培養(yǎng)24小時(shí)后，細(xì)胞密度為2.5*106個(gè)/ml時(shí)，開(kāi)始添加流加培養(yǎng)基，每24小時(shí)流進(jìn)200ml流加培養(yǎng)基，每日從反應(yīng)器內(nèi)取樣檢測(cè)細(xì)胞密度、成活率并通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)到1:2560時(shí)，即可全部收獲。