[發明專利]一種獲得完整植物葉脈的方法

在審

• 申請號: 202110327920.4
• 申請日: 2021-03-26
• 公開（公告）號: CN113049338A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 劉龍昌;郭啟超;李衛清;周正軍;郭玉瑩
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 李現艷

本發明提供一種獲得完整植物葉脈的方法，包括以下步驟：配制成固定保存液A；離析葉片；去除葉片的被毛；將葉片轉移至次氯酸鈉溶液中；將葉片先放入質量濃度為31~35%的固定保存液A中處理10~30 min，再放入質量濃度為64~70%的固定保存液A中處理10~30min，最后放入固定保存液A中處理10~14h；染色；放入無水乙醇和二甲苯混合液中，然后將葉片轉移至二甲苯中，待葉片透明，葉脈完全展露出來，自然晾干后切片保存；采用本發明獲得的葉片的末端葉脈和游離導管可完整保留，適用于各種質地和毛被類型的葉片，不僅可以處理新鮮葉片，也可處理臘葉標本葉片，處理后得到的葉脈可做成切片永久保存。

技術領域

本發明屬于植物生理生態學研究技術領域，具體涉及一種獲得完整植物葉脈的方法。

背景技術

植物葉脈特征較為穩定，常作為重要分類性狀應用于分類學領域。同時，植物葉脈具有運輸水分、養分、礦物質以及支撐和保護葉片等生理生態功能。作為重要功能性狀，由各級葉脈組成的葉脈網絡特征能夠反映植物的生態適應能力及生態適應對策。其中的末端葉脈和游離導管是決定葉片水分供需平衡的關鍵結構性狀，對植物生長、水分運輸、氣體交換、光合作用等生理功能有重要影響。近年來，葉脈網絡結構、功能（尤其是末端葉脈網絡結構特性）及其生態學意義已成為植物生理生態學研究熱點。

成功開展這方面研究的先決條件是獲取清晰完整的葉脈網絡，但由于受到葉片質地、表皮毛被等因素的影響，獲取理想葉脈網絡還很困難。目前，人們常根據葉片的質地、毛被等特點采用不同的葉片處理方法，大體上可以分為以下幾類：（1）離析法，水煮軟化或在水中發酵，化學藥液如氫氧化鈉溶液等離析，然后再用毛刷刷去表皮和葉肉；（2）化學透明法，化學藥液如氫氧化鉀溶液等浸泡離析或FAA固定液固定處理后，雙氧水等漂白，再用梯度酒精溶液脫水處理；（3）混合法，化學藥液浸泡離析或FAA固定液固定處理后，在二甲苯和丙酮混合液中用毛刷刷去表皮毛和葉肉。以上方法均存在一定缺陷，第一類方法會對末端葉脈、尤其是葉片盲脈和游離導管造成損壞；第二類方法無法有效清除表皮毛，梯度脫水處理程序繁瑣，難以大量處理葉片樣本；第三類方法在有毒藥劑中去除表皮毛，在操作過程中揮發的有毒氣體會對人體產生危害。此外，目前的方法還存在以下兩方面的問題：其一，上述方法適宜處理質地較為厚硬的葉片或臘葉標本葉片。不適宜葉片薄、質地柔軟、表皮毛被發達的葉片，在離析、去毛的過程中，末端葉脈會遭到破壞，難以獲得完整葉脈；其二，上述方法往往是針對質地、表皮特性不同植物葉片分別設計的，而生態學研究往往涉及許多植物物種，且需要群體大量取樣、不同發育時期動態取樣。針對不同葉片類型采用不同處理方法，極為不便。同時，也因為方法的不統一，使得研究結果的可信度大大降低。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種獲得完整植物葉脈的方法，葉片的末端葉脈和游離導管可完整保留，適用于各種質地和毛被類型的葉片，不僅可以處理新鮮葉片，也可處理臘葉標本葉片，處理后得到的葉脈可做成切片永久保存。

本發明為解決上述技術問題采用的技術方案是：一種獲得完整植物葉脈的方法，包括以下步驟：

步驟一：按體積比96:4~94:6取無水乙醇和冰醋酸配制成固定保存液A；

步驟二：將采集的植物葉片用清水洗凈，先用煮沸的水浸泡0~10 min，再放入質量濃度為4~6%的氫氧化鈉溶液中離析，離析時間為3~7天，待葉片的葉肉大量析出后，轉入蒸餾水中清洗；

步驟三：去除葉片的被毛，再放入蒸餾水中清洗；

步驟四：將步驟三中蒸餾水清洗后的葉片小心轉移至質量濃度為2~4%的次氯酸鈉溶液中，浸漬時間為25~35 min，待葉片完全變白，轉移至蒸餾水中清洗；

步驟五：將固定保存液A和蒸餾水制備成質量濃度為31~35%的固定保存液A和質量濃度為64~70%的固定保存液A，將步驟四處理后的葉片先放入質量濃度為31~35%的固定保存液A中處理10~30 min，再放入質量濃度為64~70%的固定保存液A中處理10~30min，最后放入固定保存液A中處理10~14h；