[發(fā)明專利]基于AFM1抗獨(dú)特型納米抗體替代黃曲霉毒素M1
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110327701.6 | 申請日： | 2021-03-26 |
| 公開（公告）號： | CN113061188B | 公開（公告）日： | 2022-06-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李培武;唐曉倩;白藝珍;王督;張奇 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所 |
| 主分類號： | C07K16/42 | 分類號： | C07K16/42;G01N33/53;G01N33/543;G01N33/58 |
| 代理公司： | 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102 | 代理人： | 喬宇 |
| 地址： | 430062 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 afm1 獨(dú)特 納米 抗體 替代 黃曲霉 毒素 m1 base sub 標(biāo)準(zhǔn) elisa | ||
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及基于AFM1抗獨(dú)特型納米抗體替代黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品的ELISA免疫分析方法。根據(jù)黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品和黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型抗體各自的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，在同一抑制率下，建立黃曲霉毒素M1濃度和黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型抗體濃度的對應(yīng)關(guān)系曲線，并對結(jié)果進(jìn)行指數(shù)回歸分析，得出二者之間的對應(yīng)關(guān)系，進(jìn)行黃曲霉毒素M1含量的檢測。黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體替代黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)物免疫檢測方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，是一種有效、可行的綠色免疫分析方法，可以應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素M1含量的檢測分析。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體作為黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品替代物的應(yīng)用。
背景技術(shù)
黃曲霉毒素是由黃曲霉或者寄生曲霉產(chǎn)生的代謝物，它們污染了多種農(nóng)產(chǎn)品，在農(nóng)作物的生長、收獲、貯存和加工過程中均被發(fā)現(xiàn)。這些代謝物是劇毒，致突變，致畸和致癌的化合物，已被認(rèn)為是人肝和肝外致癌作用的致病因子。黃曲霉毒素B1(AFB1)毒性最高，被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)歸為1類人類致癌物。AFM1是AFB1的羥基化代謝產(chǎn)物。攝取被AFB1污染的飼料的泌乳動物會將AFM1排泄到牛奶中，因此可以在各種各樣的牛奶產(chǎn)品中找到它。 AFM1也具有毒性和致癌作用，已被分類為1類致癌物。由于AFM1污染對人體健康(特別是對嬰兒和兒童)的危害，已成為全球關(guān)注的問題。歐盟對牛奶中AFM1的限制為0.05ng/mL。但是，中國、美國和巴西的限定標(biāo)準(zhǔn)均為0.5ng/mL。
先前已經(jīng)建立了許多用于AFM1檢測的方法。高效液相色譜(HPLC)和熒光檢測(FD)成功取代了薄層色譜法(TLC)，仍然是應(yīng)用最廣泛的方法之一。目前，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)和電噴霧電離四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜已經(jīng)開發(fā)了。所有這些步驟都依賴昂貴的成本，設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室和幾個(gè)小時(shí)，從而削弱了它們在AFM1檢測中的應(yīng)用。另一方面，酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)由于其成本低廉且易于應(yīng)用而變得越來越流行。免疫學(xué)方法適用于快速檢測黃曲霉毒素。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是一種高通量測定，樣品量少，主要用于AFM1的常規(guī)分析。但是，每塊板都必須使用AFM1校準(zhǔn)曲線，以減少板間差異的差異并提高準(zhǔn)確性。此外，用作校準(zhǔn)劑的純毒素對操作者和環(huán)境都有害。因此，我們尋求開發(fā)一種無毒替代品校準(zhǔn)品及檢測AFM1的綠色方法，是解決此問題的一種方法。在ELISA的間接競爭過程中，分析物競爭性地抑制特異性抗體與包被抗原的結(jié)合。分析物濃度越高，最終信號越弱。最后，顯示出S形曲線。如果無毒物質(zhì)也可以結(jié)合特異性抗體并顯示出S形校準(zhǔn)曲線，則可以將它們用作替代校準(zhǔn)物。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)不足，目的在于提供一種黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體作為黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品替代物的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
一種黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體作為黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品替代物的應(yīng)用，所述黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體為黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體VHH C4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
按上述方案，編碼黃曲霉毒素M1抗獨(dú)特型納米抗體氨基酸的核苷酸序列如SEQ IDNO:2 所示。
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