[發明專利]一種用超聲逆流結合生物酶從薏苡莖葉提取豆甾醇的方法

有效

• 申請號: 202110327520.3
• 申請日: 2021-03-26
• 公開（公告）號: CN113512084B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發明（設計）人: 李童;覃春曉;林維嘉;農璨瑞;王翠霞;李惠芹;岑奕霖;雷智冬;陳石梅;黃鎖義;黃與路
• 申請（專利權）人: 右江民族醫學院
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 南寧東之智專利代理有限公司 45128
• 代理人: 楊秋慧;汪治興

本發明公開了一種用超聲逆流結合生物酶從薏苡莖葉提取豆甾醇的方法，先將薏苡粉加入含有生石灰和硫代硫酸鈉的溶液浸泡，過濾，再將薏苡粉和水再放入超聲逆流提取罐，加入生物酶，在不同溫度下超聲逆流提取，過濾，得浸提液；浸提液再經過減壓濃縮，再將浸膏溶于加有氫氧化鈉和三聚磷酸鈉的有機溶劑進行皂化反應；將皂化產物用PBS緩沖液和乙腈萃取，棄去水相，減壓濃縮回收乙腈，即得粗提物；再將粗提物填充于聚丙烯酰胺凝膠柱層析，用洗脫劑洗脫，收集豆甾醇洗脫液，濃縮并回收洗脫液，得到的豆甾醇產物經過濾，結晶，即可得到豆甾醇產品。本方法具有提取率高、提取效率高、工藝較簡單、生產成本低、產品純度達到99％以上等優點。

技術領域

本發明涉及植物有效成分提取技術領域，具體是一種用超聲逆流結合生物酶從薏苡莖葉提取豆甾醇的方法。

背景技術

薏苡(Coixlachryma－jobi?L.)為禾本科(Gramineae)薏苡屬，味甘淡，性微寒，具有健脾、補肺、清熱、利濕的功效，素有“滋補保健之王”的美譽。目前對薏苡的化學成分研究比較少，且較多集中在薏苡仁，其藥理活性研究方面的文獻報道也不多，生物活性作用物質基礎不明確，導致其在臨床上的應用受到局限。研究證明薏苡葉中也含有甾體、多糖、黃酮、有機酸、鞘質、三萜等化學成分，因此研究如何從薏苡葉中提取豆甾醇能夠變廢為寶，提高薏苡全株的價值。

豆甾醇(stigmaster01)，C29H450。分子量為412，又稱豆甾一5，22一二烯一3B一醇或24R一乙基膽甾一5，22一二烯一3B一醇,是一種植物甾醇，廣泛存在于多種植物中。豆甾醇具有顯著的抗氧化、抗腫瘤、抗心血管病等多種藥理活性，也是合成甾類藥物的起始原料，在醫藥、食品和化工等行業均有應用。近年來，隨著新甾體藥物的發現、生產的發展、生產規模的擴大、原料需要量也逐漸增加；另一方面由于不合理的采掘，造成資源短缺，植物中皂甙含量下降，使國際市場供需出現矛盾，如何獲得更多更高純度的豆甾醇是豆甾醇研究的一個重要方向。

申請人在此之前提供了一種從薏苡莖中提取豆甾醇的方法，包括酶解、超聲波提取、皂化、尿素柱層析和結晶等步驟。但在試驗過程中申請人發現利用該方法從薏苡葉提取豆甾醇還是存在雜質較多、產品純度較低、提取率較低、生產效率低等不足。因此，本發明對原有工藝進行了更好的改進。

發明內容

本發明目的在于提供一種用超聲逆流結合生物酶從薏苡莖葉提取豆甾醇的方法。本發明方法利用超聲波逆流結合生物酶提取豆甾醇，具有提取率高、產品純度高、提取效率高、工藝較簡單、生產成本低等優點。

為了實現以上目的，本發明采用的技術方案如下：

一種用超聲逆流結合生物酶從薏苡莖葉提取豆甾醇的方法，包括如下步驟：

(1)將薏苡莖或葉清洗干凈，破碎至40-100目，過篩，得薏苡粉，先將薏苡粉加入含有生石灰和硫代硫酸鈉的溶液浸泡30-60min，過濾，再將薏苡粉和水再放入超聲逆流提取罐，加入生物酶，在不同溫度下超聲逆流提取，過濾，得浸提液；所述生物酶由纖維素酶、果膠酶和木聚糖酶組成；

(2)浸提液再經過減壓濃縮，得浸膏，再將浸膏溶于加有氫氧化鈉和三聚磷酸鈉的有機溶劑，加熱至50-70℃皂化反應60-90min，得皂化產物；

(3)將皂化產物用PBS緩沖液和乙腈萃取，棄去水相，減壓濃縮回收乙腈，即得粗提物；

(4)將粗提物填充于聚丙烯酰胺凝膠柱層析，用洗脫劑洗脫，收集豆甾醇洗脫液，濃縮并回收洗脫液，得到的豆甾醇產物經過濾，結晶，即可得到豆甾醇產品。

進一步地，所述生石灰和硫代硫酸鈉的質量比為2-4:1；其加入量為配成浸泡溶液質量濃度為3-5％。

進一步地，所述超聲逆流提取在溫度為50-60℃超聲逆流提取1-2h,升溫至65-70℃提取1.0-1.5h，最后升溫至75-80℃提取0.5-1.0小時。