[發明專利]一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202110326254.2
• 申請日: 2021-03-26
• 公開（公告）號: CN113018501A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 張平;李棟;孫洪濤
• 申請（專利權）人: 張平
• 主分類號: A61L15/26
• 分類號: A61L15/26;A61L15/40;A61L15/44;A61L26/00;C12N5/071
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 李彥彥

本發明提供了一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料、制備方法及其應用，包括以下步驟：三維培養得到內皮祖細胞、采用內皮祖細胞制備外泌體、通過外泌體得到外泌體醫用敷料。本發明所述的內皮祖細胞外泌體醫用敷料，以健康的臍帶血內皮祖細胞為原料，經過嚴格和安全的制備，包含高活力的外泌體，納米級的磷脂囊泡中包裹著和細胞生長、修復等功能密切相關的數百種蛋白質和microRNA等生物活性分子，通過激活患者機體的內源性組織特異性干細胞、建立組織損傷修復的再生微環境，促進糖尿病足、褥瘡、燒傷、燙傷等疾病的傷口組織修復，以及利器、工具等造成的各類戰創傷的現場救治和傷口處理。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其是涉及一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料、制備方法及其應用。

背景技術

糖尿病在全世界范圍內的高發，也伴隨著糖尿病并發癥等嚴重的問題，嚴重影響患者的健康和生活質量。糖尿病傷口愈合是臨床治療中的難題之一。通過生物活性敷料遞送多種類型的干細胞和內皮祖細胞衍生的外泌體，是糖尿病傷口修復的一種潛在策略。

高血糖引起的微血管功能障礙是導致糖尿病并發癥的主要原因之一，造成缺血以及傷口愈合速度減慢。一般來說，傷口愈合經歷三個典型的階段，包括炎癥、增殖和基質重塑，這些需要血管為創傷修復提供營養和氧氣支持。因此，改善糖尿病患者傷口的血管生成和血運重建對于加速傷口愈合至關重要。

糖尿病性傷口的傳統臨床治療方法包括控制血糖、手術清創、血運重建和創傷敷料，而血管生成及其血運重建決定了手術成功和后期愈合情況。通常，生長因子治療如堿性成纖維細胞生長因子和血管內皮生長因子能幫助血管生成以及糖尿病傷口愈合更快。然而，生長因子的遞送、劑量和價格是其應用的障礙。因此，迫切需要新的策略和產品通過促進傷口組織中的血管生成來治療糖尿病傷口。

研究表明，來自間充質干細胞的外泌體有助于糖尿病足和褥瘡等病癥的傷口愈合。間充質干細胞衍生的外泌體是納米級細胞外囊泡，具有與間充質干細胞類似的有益功能。此外，與間充質干細胞相比，外泌體顯示出一些獨特的優勢，例如免疫原性低、穩定性高、易于儲存。很多研究也證實了使用外泌體作為傷口愈合療法的潛力，例如，與骨髓來源的間充質干細胞相比，脂肪來源的間充質干細胞具有特殊的優勢，如易于獲得和豐富的來源，能夠通過優化成纖維細胞的功能加速皮膚傷口愈合。

然而，外泌體由于其在體內快速清除和相對較短的體內半衰期，將外泌體應用于傷口愈合仍然面臨挑戰。此外，由于組織再生過程通常需要很長時間，在此期間游離外泌體的存活率得不到保證。因此，開發一種能夠維持外泌體活性以及持續釋放的生物相容性外泌體醫用敷料，將對外泌體治療傷口愈合是至關重要的。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在提出一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料、制備方法及其應用，以刺激患者機體的內源性干細胞，加速糖尿病足、褥瘡、燒傷、燙傷、切割傷、擦傷或戰創傷的傷口組織修復及提高傷口愈合質量的應用。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料的制備方法，包括以下步驟：

a.三維培養得到內皮祖細胞；

b.采用含無外泌體血清的培養基培養步驟a中得到的內皮祖細胞，得到上清液，將上清液通過差速離心后制備外泌體；

c.在聚己內酯高分子膜復合層表面涂覆一層步驟b中得到的外泌體及一層水凝膠溶液后靜置，凝固后得到外泌體醫用敷料，或將步驟b中得到的外泌體制成外泌體凍干粉，將外泌體凍干粉與純化水和/或透明質酸鈉混合后得到噴劑型外泌體醫用敷料。

優選的，步驟a中三維培養的具體步驟包括：

(1)將人臍帶血來源的內皮祖細胞使用完全培養基接種至培養瓶中，并使內皮祖細胞密度達到90％，得到原代內皮祖細胞；