[發明專利]一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202110326254.2
• 申請日: 2021-03-26
• 公開（公告）號: CN113018501A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 張平;李棟;孫洪濤
• 申請（專利權）人: 張平
• 主分類號: A61L15/26
• 分類號: A61L15/26;A61L15/40;A61L15/44;A61L26/00;C12N5/071
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 李彥彥

1.一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.三維培養得到內皮祖細胞；

b.采用含無外泌體血清的培養基培養步驟a中得到的內皮祖細胞，得到上清液，將上清液通過差速離心后制備外泌體；

c.在聚己內酯高分子膜復合層表面涂覆一層步驟b中得到的外泌體及一層水凝膠溶液后靜置，凝固后得到外泌體醫用敷料，或將步驟b中得到的外泌體制成外泌體凍干粉，將外泌體凍干粉與純化水和/或透明質酸鈉混合后得到噴劑型外泌體醫用敷料。

2.根據權利要求1所述的內皮祖細胞外泌體醫用敷料的制備方法，其特征在于，步驟a中三維培養的具體步驟包括：

(1)將人臍帶血來源的內皮祖細胞使用完全培養基接種至培養瓶中，并使內皮祖細胞密度達到90％，得到原代內皮祖細胞；

(2)將原代內皮祖細胞接種至細胞培養器中，然后在水平轉速為20rpm～40rpm條件下旋轉培養內皮祖細胞，得到分散好的內皮祖細胞，其中，細胞培養器的底部的內表面為弧面且經過抗細胞貼附處理；

(3)采用聚氟乙烯合成纖維材料為載體，將分散好的內皮祖細胞按3x10⁵cells/mL的密度接種入裝有載體的培養容器中，接種細胞，并充分混勻，且每10～30min混勻一次，持續3～6h，待細胞粘附于載體后，每日換液一次，持續4天，收集得到三維培養的內皮祖細胞。

3.根據權利要求2所述的內皮祖細胞外泌體醫用敷料的制備方法，其特征在于，所述載體為經過滅菌的，所述滅菌的具體步驟為：

將適量無Ca²⁺、Mg²⁺的PBS溶液完全浸泡載體，并用玻璃質容器儲存，然后在121℃高壓蒸汽中滅菌30min，去除PBS溶液后，得到滅菌的載體。

4.根據權利要求2所述的內皮祖細胞外泌體醫用敷料的制備方法，其特征在于，所述載體的用量為25.0～30.0g/L。

5.根據權利要求1所述的內皮祖細胞外泌體醫用敷料的制備方法，其特征在于，步驟b中將上清液差速離心的具體步驟包括：

(1)用臺式常溫離心機，將所述培養上清液在常溫下以1000g以下轉速離心10分鐘，得到離心液；

(2)將離心液在4℃溫度下，以10000g以上轉速離心30分鐘，得到超濾液；

(3)將超濾液用0.22μm過濾器過濾，得到濃縮液；

(4)將所述濃縮液在4℃條件下，以100000g以上轉速離心70分鐘，棄上清得到所需外泌體。

6.一種內皮祖細胞外泌體醫用敷料，其特征在于：根據權利要求1-5任一所述的制備方法得到。

7.根據權利要求6所述的內皮祖細胞外泌體醫用敷料在治療糖尿病足、褥瘡、燒傷、燙傷、切割傷、擦傷或戰創傷時作為敷料促進傷口愈合的應用。