[發(fā)明專利]一種分泌鴨新型呼腸孤病毒σB蛋白單抗的雜交瘤細胞、單抗及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110323314.5
• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN112980802B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設計）人: 云濤;張存;華炯鋼;葉偉成;陳柳;倪征;朱寅初
• 申請（專利權）人: 浙江省農業(yè)科學院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發(fā)明公開了一種分泌鴨新型呼腸孤病毒σB蛋白單抗的雜交瘤細胞、單抗及應用。所述雜交瘤細胞保藏號為CCTCC NO：C202148，分泌的鴨新型呼腸孤病毒σB蛋白單抗，具有較高的效價，且具有較強的特異性。使用制備的單抗建立了一種以純化的重組NDRV σB蛋白作為包被抗原，HRP標記的抗σB蛋白單抗作為檢測抗體的阻斷ELISA，該方法能特異性地識別NDRV陽性血清，而與其它鴨、鵝常見病抗體陽性血清無交叉反應；重復性試驗表明，批間和批內的變異系數(shù)均小于10％；敏感性為90.5％，特異性為94.5％，且與病毒中和試驗的符合率為93.8％。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，特別是涉及一種分泌鴨新型呼腸孤病毒σB蛋白單抗的雜交瘤細胞、單抗及應用。

背景技術

鴨呼腸孤病毒(duck reovirus，DRV)分為兩種基因型，即I型和II型。基因I型為經典型鴨呼腸孤病毒(classical DRV，CDRV)，即番鴨呼腸孤病毒(Muscovey duck reovirus，MDRV)，該病毒主要感染番鴨和半番鴨，引起鴨壞死性肝炎(俗稱番鴨“白點病”或“花肝病”)，以肝脾等臟器出現(xiàn)大量粟粒狀壞死灶為病理特征，該病自1997以來在我國南方廣東、廣西、福建、浙江和江西等廣泛流行；基因II型為鴨新型呼腸孤病毒(novel DRV，NDRV)，該病毒可引起番鴨、半番鴨、北京鴨和鵝等水禽發(fā)病，其特征性病變?yōu)楦纹⒊霈F(xiàn)嚴重的壞死和出血(俗稱“出血性壞死性肝炎”或“脾出血壞死癥”)，該病最早發(fā)生于2000年，此后開始在我國的江蘇、浙江、福建、廣東、河北、山東等省暴發(fā)與流行。目前，基因II型(NDRV)已成為我國流行的優(yōu)勢基因型。

NDRV基因組由10個節(jié)段的雙鏈RNA構成，全長23419bp。病毒粒子由二十面體對稱的雙層衣殼組成，直徑70nm、無囊膜。依據(jù)SDS-PAGE電泳結果均可將基因組分為3個群，分別是：L組群(L1，L2，L3)，M組群(M1，M2，M3)和S組群(S1，S2，S3，S4)。σB是NDRV主要的核衣殼組成成分和外衣殼蛋白，其功能與哺乳動物呼腸孤病毒(Mammalian reovirus，MRV)的σ3蛋白和ARV及CDRV的σB蛋白相似，誘導宿主機體產生群特異性中和抗體。ARV與CDRV的σB蛋白之間存在保守的免疫原性區(qū)及群特異性抗原表位。NDRV與CDRV為DRV不同的基因型，而DRV與ARV均屬于禽正呼腸孤病毒種群成員；NDRVσB蛋白與ARV及CDRV的σB蛋白氨基酸同源性分別約60％和70％。

目前，NDRV的主要檢測方法有病毒分離、RT-PCR、病毒中和試驗(VNT)和間接ELISA([1]陳仕龍，陳少鶯，程曉霞，江斌，林峰強，王劭，朱小麗，李兆龍，張世忠。3種禽類呼腸孤病毒血清學相關性及致細胞病變差異分析.畜牧獸醫(yī)學報，2011，42(4)：533-537.[2]YunT，Chen HP，Yu B，Zhang C，Chen L，Ni Z，Hua JG，Ye WC.Development and applicationof an indirect ELISA for the detection of antibodies to novel duckreovirus.Journal ofVirological Methods，2015，220：55-59.)等。其中ELISA方法對于抗原和抗體均可檢測，且該方法操作簡單、快速、易批量化、以及靈敏性高和特異性強等特點，已成為病原流行病學調查抗體檢測的首選方法?，F(xiàn)有研究表明，各品種的鴨及鵝均可被NDRV感染及致病，而目前又沒有一種商品化的廣譜抗不同品種鴨及鵝的通用型血清二抗，這給NDRV病的血清學診斷帶來諸多不便。

發(fā)明內容

目前NDRVσB蛋白的表位抗原性以及是否存在群特異性抗原表位還不清楚。因此，本申請利用原核表達的重組σB蛋白作為免疫原制備了針對NDRVσB蛋白的特異性單克隆抗體(MAb)，可用于NDRV特異性檢測。