[發(fā)明專利]一種基于嵌合P54抗原表位的非洲豬瘟病毒抗體檢測試劑盒及應用

有效

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• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN113045673B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發(fā)明（設計）人: 黃超華;花群義;曹琛福;吳江;史衛(wèi)軍;林彥星;林永濤;翁巧玉;曾少靈;楊俊興
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳海關(guān)動植物檢驗檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京蕙識同聯(lián)專利代理事務所(特殊普通合伙) 11966
• 代理人: 張林

1.一種嵌合P54蛋白抗原表位的重組藍舌病病毒VP7蛋白，其特征在于，所述VP7蛋白的47-51位柔性序列被替換為EDIQFINPYQ；所述重組藍舌病病毒VP7蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種嵌合非洲豬瘟病毒P54蛋白抗原表位的藍舌病病毒核心樣顆粒，其特征在于，所述核心樣顆粒由藍舌病病毒VP3蛋白和權(quán)利要求1所述重組藍舌病病毒VP7蛋白組裝而成；所述VP3蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種非洲豬瘟病毒P54抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包含權(quán)利要求2所述的藍舌病病毒核心樣顆粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的非洲豬瘟病毒P54抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中酶標板包被權(quán)利要求2所述的藍舌病病毒核心樣顆粒；所述試劑盒中酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的針對非洲豬瘟病毒病毒P54抗原表位的單克隆抗體；所述P54抗原表位的單克隆抗體為P54抗原表位為EDIQFINPYQ的單克隆抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標板的包被方法是：將嵌合有非洲豬瘟病毒P54蛋白抗原表位的核心樣顆粒用0.1-0.2M pH8.0的Tris鹽酸緩沖液稀釋成1.0-2.0μg/mL進行包被，并用含有1-3％牛血清白蛋白封閉。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標板的包被方法具體是：將嵌合有非洲豬瘟病毒P54蛋白抗原表位的核心樣顆粒用0.1M pH8.0的Tris鹽酸緩沖液稀釋成2.0μg/mL的包被工作液，然后按照100μl/孔加到96孔酶標板，4℃下放置12h，按照200μL/孔加入含有2％牛血清白蛋白的封閉液，37℃封閉處理2～3h，甩干后，待酶標板干燥后2～8℃密封保存。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標抗體為針對非洲豬瘟病毒病毒P54蛋白抗原表位66EDIQFINPYQ75的單克隆抗體；所述酶標抗體工作濃度為1:2000-1:4000。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括0.1mg/mL的四甲基聯(lián)苯胺TMB顯色液和2M的硫酸溶液終止液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的的抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照和陰性對照，所述陽性對照血清為經(jīng)商品化試劑盒確定的非洲豬瘟陽性血清；所述陰性對照為無特定病原SPF豬血清。

10.權(quán)利要求1所述的重組藍舌病病毒VP7蛋白，或權(quán)利要求2所述的藍舌病病毒核心樣顆粒在制備用于檢測非洲豬瘟病毒感染或非洲豬瘟疫苗接種后動物抗體水平的試劑盒中的應用。