[發明專利]一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法

在審

• 申請號: 202110321633.2
• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN113151418A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 謝全亮;王旭初;李鴻彬
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;G06K9/62
• 代理公司: 成都中弘信知識產權代理有限公司 51309
• 代理人: 張芳

本發明公開了一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法，選取待測橡膠草完整的植物組織；選擇所述待測橡膠草進行形態學觀察初篩得到一次篩選的橡膠草；對篩選后的所述橡膠草進行分子鑒定，對獲得的數據進行統計和分析輸出結果；通過所述結果鑒定識別所述待測橡膠草。本發明可以結合形態學觀察和分子水平共同鑒定，能夠排除蒲公英與橡膠草雜種干擾，既適于從野外橡膠草的植物材料收取，還可用于橡膠草純種種質保存。

技術領域

本發明屬于植物組織鑒定技術領域，尤其涉及一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法。

背景技術

橡膠草其中甲羥戊酸(MVA)途徑中用于調節天然橡膠生物合成，橡膠草是二倍體(2n＝16)，具有相對簡單的基因組，長度為1.29Gb，其中包含46,731個預測的蛋白質編碼基因，橡膠草根含有高分子量橡膠分子，其特性與巴西橡膠樹的橡膠膠乳相當，可以作為一種替代橡膠作物，橡膠草根的橡膠含量高，占其總干重的3％至28％[17]，它們也是菊粉的新來源(線性β-(2-1)-連鎖果聚糖)，這是另一種豐富的蒲公英代謝產物，存儲在韌皮部附近的實質根細胞液泡中，與質外分離的乳膠蟲相鄰，是食品工業和生物乙醇生產的重要材料。此外，橡膠草可以在相對較短的生命周期中在寒冷和溫帶地區廣泛生長，并且易于收獲和進行遺傳轉化，因此可以用作發明小麥基因功能的理想模型植物。天然橡膠的生物合成材料。

但是，由于橡膠草植物特征容易與其他蒲公英混淆，普通蒲公英葉片為羽狀，邊緣呈鋸齒狀，基部為楔形，而橡膠草葉片為楔形，葉緣幾乎光滑而圓形。從許多橡膠草組織中可以檢測到大量的膠乳細胞和橡膠顆粒，并且橡膠草的干燥根含有大量的天然橡膠,膠乳細胞和橡膠顆粒只能在橡膠草的靜脈，莖和根中檢查,其根乳膠中的平均分子量為2180kDa，這與從蒲公英中獲得的非常相似。因此，單純沖分子量進行比較難以區別橡膠草和蒲公英。因此需要一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法。

發明內容

本發明提供一種排除蒲公英與橡膠草雜種干擾，基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法。

本發明包括以下步驟：

A選取待測橡膠草完整的植物組織；

B選擇所述待測橡膠草進行形態學觀察初篩得到一次篩選的橡膠草；

C對篩選后的所述橡膠草進行分子鑒定，對獲得的數據進行統計和分析輸出結果；

D通過所述結果鑒定識別所述待測橡膠草；

進一步地，所述分子鑒定的方法包括

a利用層析法待測橡膠草提取葉綠體后；

b提取橡膠草葉綠體的總DNA，用橡膠草葉綠體物種特異性標記 C5基因進行檢測進行PCR后；

c經1.2％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，其顯示橡膠草和普通蒲公英正確條帶(659bp)，

d用TaqI酶進行PCR產物單酶切，在橡膠草(C5)產物中會出現多條不定片段的多態性現象，酶切后能夠出現多態性條帶，由此確定為橡膠草。

進一步地，所述形態學觀察的方法包括

A獲取標準橡膠草的特征圖像中并選定清晰而且具有特征明顯的圖形；

B將所述標準橡膠草的圖像數據進行記錄儲存，作為待測橡膠草的圖像比對的標準圖像數據并儲存于植物特征數據庫；

C當橡膠草需要進行識別鑒定時，利用植物特征數據庫中橡膠草模型或者在實時現場應用同樣的方法測量橡膠草特征圖形對應的數據進行計算并比對；

進一步地，所述反應體系為：

DNA 2μL

TaKaRa 1×PCRMix7μL

Primers 1μL