[發明專利]一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法

在審

• 申請號: 202110321633.2
• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN113151418A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 謝全亮;王旭初;李鴻彬
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;G06K9/62
• 代理公司: 成都中弘信知識產權代理有限公司 51309
• 代理人: 張芳

1.一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A選取待測橡膠草完整的植物組織；

B選擇所述待測橡膠草進行形態學觀察初篩得到一次篩選的橡膠草；

C對篩選后的所述橡膠草進行分子鑒定，對獲得的數據進行統計和分析輸出結果；

D通過所述結果鑒定識別所述待測橡膠草。

2.根據權利要求1所述一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法，其特征在于，所述分子鑒定的方法包括

a利用層析法待測橡膠草提取葉綠體后；

b提取橡膠草葉綠體的總DNA，用橡膠草葉綠體物種特異性標記C5基因進行檢測進行PCR后；

c經1.2％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，其顯示橡膠草和普通蒲公英正確條帶(659bp)，

d用TaqI酶進行PCR產物單酶切，在橡膠草(C5)產物中會出現多條不定片段的多態性現象，酶切后能夠出現多態性條帶，由此確定為橡膠草。

3.根據權利要求1所述一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法，其特征在于，所述形態學觀察的方法包括

A獲取標準橡膠草的特征圖像中并選定清晰而且具有特征明顯的圖形；

B將所述標準橡膠草的圖像數據進行記錄儲存，作為待測橡膠草的圖像比對的標準圖像數據并儲存于植物特征數據庫；

C當橡膠草需要進行識別鑒定時，利用植物特征數據庫中橡膠草模型或者在實時現場應用同樣的方法測量橡膠草特征圖形對應的數據進行計算并比對。

4.根據權利要求2所述一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法，其特征在于，所述反應體系為：

DNA 2μL

TaKaRa 1×PCRMix7μL

Primers 1μL

ddH2O 10μL

Totalvolume 20.0μL

反應條件設定為：預變性94℃,3min；變性94℃,30sec，退火54℃,30sec，延伸72℃，1min，循環30次；72℃，10min；4℃存放。

5.根據權利要求2所述一種基于形態學和分子鑒定識別橡膠草的方法，其特征在于，以橡膠草葉綠體(Chloroplast)基因特異引物C5(InterspacebetweentrnN-GUUandrps15)作為檢測引物進行PCR反應，引物序列為：Annotation:C5

(InterspacebetweentrnN-GUUandrps15)

Forwardprimer:5′-TCAAAGGATCTATGCGCAATCA-3′

Reverseprimer:5′-TCGAGAATTGAAGACCCCTAGT-3′

C5基因總長Length:462bp,time:54℃，

Enzyme:TaqI,TKS:Polymorphic,TO。