[發(fā)明專利]一種樹木細根的石蠟切片制作方法

有效

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• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN112903406B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發(fā)明（設計）人: 趙麗娟;謝勇;程幸;王維嘉;龔俊偉;張意靈
• 申請（專利權(quán)）人: 中南林業(yè)科技大學
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N1/28
• 代理公司: 蘇州佳捷天誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 32516
• 代理人: 鄂艷濤

本發(fā)明公開一種樹木細根的石蠟切片制作方法，涉及植物解剖技術(shù)領(lǐng)域，包括步驟：步驟一，取材與固定：取樹木細根材料，處理后固定并抽氣；步驟二，保存與軟化：將低級幼嫩細根保存；將高級堅硬細根軟化；步驟三，脫水：將低級幼嫩細根置于乙醇中脫水；將高級堅硬細根置于蒸餾水、乙醇中脫水；步驟四，透明：材料置于混合溶液、二甲苯、二甲苯中透明；步驟五，浸蠟：材料置于混合液中浸泡并浸蠟；步驟六，包埋：用液蠟包埋；步驟七，切片、粘片、展片與烤片：將材料切出蠟帶，粘于載玻片上，將蠟帶舒展，烘烤；步驟八，脫蠟和復水：將切片置于二甲苯、二甲苯、混合溶液中脫蠟，置于乙醇和蒸餾水中復水；步驟九，染色和封片：對切片染色，封片干燥。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物解剖技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種樹木細根的石蠟切片制作方法。

背景技術(shù)

石蠟切片是觀察植物器官、組織和細胞最常用的一種方法，是植物解剖學研究當中最為經(jīng)典的實驗技術(shù)之一。

細根通常是指直徑≤2mm的根，是植物獲取土壤水分和養(yǎng)分的重要器官，具有復雜的分支系統(tǒng)，近年來針對細根的研究主要基于根序分級，即最先端具有根尖的根定義為1級根，兩條1級根交匯形成的母根為2級根，2級根的母根為3級根，依此類推，通常會區(qū)分到5級根。細根對植物功能和生態(tài)系統(tǒng)過程發(fā)揮著關(guān)鍵作用，厘清其功能性狀(形態(tài)、解剖、化學和生理性狀)之間的關(guān)系及其機理對于深入理解植物功能性狀和氣候變化下生態(tài)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系具有重要意義。樹木細根石蠟切片技術(shù)是研究樹木細根解剖學性狀的重要手段，但由于樹木從低級細根到高級細根的木質(zhì)部逐步發(fā)育完善，在組織結(jié)構(gòu)上具有較大差異，具體表現(xiàn)為低級細根(通常為1～3級根)薄壁組織發(fā)達，極為幼嫩，而高級細根(通常為4～5級根)木質(zhì)部和韌皮部發(fā)達，材質(zhì)堅硬且木質(zhì)部、韌皮部和形成層硬度不一致，因此常規(guī)的石蠟切片技術(shù)極易導致低級幼嫩細根組織皺縮和高級堅硬細根組織褶皺或破碎，不良的切片效果嚴重影響對樹木細根解剖性狀的觀察，限制了樹木細根功能性狀的研究。

因此，針對極為幼嫩的低級細根和堅硬且硬度不一致的高級細根，若是能夠根據(jù)材料的特性對石蠟切片方法進行改進和完善，能為樹木細根的顯微解剖學研究提供技術(shù)支撐，對揭示樹木細根功能性狀之間關(guān)系及其機理的研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡單且通用、能夠保證得到的切片組織結(jié)構(gòu)清晰完整，便于觀察的樹木細根的石蠟切片制作方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種樹木細根的石蠟切片制作方法，包括如下步驟：

步驟一，取材與固定：利用工具在室外取得樹木細根材料，處理過后置于固定液中固定并抽氣，得到固定后的樹木細根材料，所述樹木細根材料包括低級幼嫩細根和高級堅硬細根；

步驟二，保存與軟化：將固定后的低級幼嫩細根置于70％乙醇中保存，將高級堅硬細根置于20％乙二胺中軟化，得到軟化后的高級堅硬細根；

步驟三，脫水：將固定后的低級幼嫩細根依次置于70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、無水乙醇中進行脫水，得到脫水后的低級幼嫩細根，將軟化后的高級堅硬細根依次置于蒸餾水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、無水乙醇中進行脫水，得到脫水后的高級堅硬細根；

步驟四，透明：將脫水后的材料依次置于體積比為1:1的無水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯中進行透明，得到透明后的材料；

步驟五，浸蠟：將透明后的材料置于體積比為1:1的二甲苯和液蠟混合液中浸泡，然后將透明后的材料多次置于純液蠟中浸蠟，得到浸蠟后的材料；

步驟六，包埋：將浸蠟后的材料用同一批液蠟包埋，得到包埋后的材料；

步驟七，切片、粘片、展片與烤片：將包埋后的材料用切片機切出蠟帶，粘于均勻涂抹粘片劑的載玻片上，用蒸餾水將蠟帶舒展，然后置于烤片機上烤得到干燥后的切片；