[發(fā)明專利]一種樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110317793.X
• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN112903406B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙麗娟;謝勇;程幸;王維嘉;龔俊偉;張意靈
• 申請（專利權(quán)）人: 中南林業(yè)科技大學(xué)
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N1/28
• 代理公司: 蘇州佳捷天誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32516
• 代理人: 鄂艷濤

1.一種樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟一，取材與固定：利用工具在室外取得樹木細(xì)根材料，處理過后置于固定液中固定并抽氣，得到固定后的樹木細(xì)根材料；

步驟二，保存與軟化：將固定后的低級幼嫩細(xì)根置于70％乙醇中保存；將高級堅硬細(xì)根置于20％乙二胺中軟化，得到軟化后的高級堅硬細(xì)根；

步驟三，脫水：將固定后的低級幼嫩細(xì)根依次置于70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、無水乙醇中進(jìn)行脫水，得到脫水后的低級幼嫩細(xì)根，將軟化后的高級堅硬細(xì)根依次置于蒸餾水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、無水乙醇中進(jìn)行脫水，得到脫水后的高級堅硬細(xì)根；

步驟四，透明：將脫水后的材料依次置于體積比為1:1的無水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯中進(jìn)行透明，得到透明后的材料；

步驟五，浸蠟：將透明后的材料置于體積比為1:1的二甲苯和液蠟混合液中浸泡，然后將透明后的材料多次置于純液蠟中浸蠟，得到浸蠟后的材料；

步驟六，包埋：將浸蠟后的材料用同一批液蠟包埋，得到包埋后的材料；

步驟七，切片、粘片、展片與烤片：將包埋后的材料用切片機切出蠟帶，粘于均勻涂抹粘片劑的載玻片上，用蒸餾水將蠟帶舒展，然后置于烤片機上烤得到干燥后的切片；

步驟八，脫蠟和復(fù)水：將干燥后的切片依次置于二甲苯、二甲苯、體積比為1:1的無水乙醇和二甲苯混合溶液中脫蠟，然后依次置于無水乙醇、無水乙醇、95％乙醇、85％乙醇、70％乙醇、50％乙醇、30％乙醇和蒸餾水中復(fù)水；

步驟九，染色和封片：采用番紅-固綠染色法對切片進(jìn)行染色，然后進(jìn)行封片自然干燥；

所述步驟一中將低級幼嫩細(xì)根置入新配的50％FAA固定液中抽氣10～15min，然后固定24h；所述50％FAA固定液中50％乙醇、冰醋酸和37％甲醛的體積比為90:5:5；

所述步驟一中將堅硬的高級細(xì)根置入新配的70％FAA固定液中抽氣20～25min，然后固定24h，所述70％FAA固定液中70％乙醇、冰醋酸、37％甲醛的體積比為90:5:5。

2.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：步驟二中，將高級堅硬細(xì)根從固定液中取出用70％乙醇洗滌3min，然后置于70％乙醇中浸泡12h，再依次轉(zhuǎn)入50％乙醇、30％乙醇、蒸餾水中各浸泡2h，接著將高級堅硬細(xì)根置于20％乙二胺中，抽氣至不再產(chǎn)生氣泡，約10min，最后將高級堅硬細(xì)根浸泡在乙二胺中軟化4～6d。

3.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：所述步驟三中材料的脫水時間為1-2h。

4.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：所述步驟四中材料的透明時間為30min-1.5h。

5.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：所述步驟五中透明后的材料置于體積比為1:1的二甲苯和液蠟混合液中浸泡時間為12h，溫度為40℃；然后將材料置于純液蠟中浸蠟，液蠟更換次數(shù)為3次，每次浸蠟時間為4h，溫度為65℃。

6.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：所述步驟八中，將干燥后的切片放入二甲苯中浸泡的時間為40min，然后更換新的二甲苯，浸泡時間為20min，再放入到體積比為1:1的無水乙醇和二甲苯混合溶液中浸泡30min，且始終控制在30℃的恒溫條件中。

7.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：所述步驟八中復(fù)水的時間范圍為10min-30min。

8.如權(quán)利要求1所述的樹木細(xì)根的石蠟切片制作方法，其特征在于：所述步驟九中，將切片置于1％番紅溶液中浸泡12h，然后用蒸餾水將切片洗滌3次洗去浮色，隨后依次置于30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇、95％乙醇中各浸泡1min，再用0.5％固綠浸泡染色30s，接著將切片依次置于95％乙醇、無水乙醇、無水乙醇中各浸泡1min以洗去浮色，再將切片依次置于體積比為1:1的無水乙醇和二甲苯混合溶液、二甲苯、二甲苯中各浸泡20s，隨后立即滴加中性樹膠，蓋上蓋玻片進(jìn)行封片，最后自然晾干。