[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用鈍齒棒桿菌發(fā)酵生產(chǎn)1,4-丁二胺的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110317317.8
• 申請(qǐng)日: 2021-03-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113061562B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐美娟;饒志明;楊鳳玉;楊套偉;張顯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/21
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/21;C12N15/77;C12P13/00;C12R1/15
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種重組鈍齒棒桿菌，其特征在于，同時(shí)表達(dá)了精氨酸脫羧酶突變體和胍丁胺酶，所述精氨酸脫羧酶突變體是通過(guò)將氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示的精氨酸脫羧酶第533位的丙氨酸突變成脯氨酸得到的，所述胍丁胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示，所述重組鈍齒棒桿菌以C. crenatum SYPA5-5為表達(dá)宿主。

2.如權(quán)利要求1所述的重組鈍齒棒桿菌，其特征在于，所述重組鈍齒棒桿菌以pXMJ19為表達(dá)載體。

3.構(gòu)建權(quán)利要求1或2所述的重組鈍齒棒桿菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將化學(xué)合成的精氨酸脫羧酶突變體基因和胍丁胺酶基因串聯(lián)后連接到表達(dá)載體pXMJ19上，構(gòu)建重組質(zhì)粒；

（2）將步驟（1）制備得到的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到C. crenatum SYPA5-5 中，制備得到重組鈍齒棒桿菌。

4.一種生產(chǎn)1,4-丁二胺的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1或2所述的重組鈍齒棒桿菌發(fā)酵生產(chǎn)1,4-丁二胺。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法為，將所述重組鈍齒棒桿菌接種至種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得到種子液，將得到的種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵制備得到1,4-丁二胺。

6.如權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述方法為：所述重組鈍齒棒桿菌接種至種子培養(yǎng)基中，在30 °C，220 rpm條件下培養(yǎng)24 h，制備得到種子液。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將制備得到的種子液按照10%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30℃，220 rpm條件下發(fā)酵培養(yǎng)96 h。

8.權(quán)利要求1或2所述的重組鈍齒棒桿菌在制備含有1,4-丁二胺的產(chǎn)品中的應(yīng)用。