[發明專利]一種制備重組金黃色葡萄球菌疫苗的方法

有效

• 申請號: 202110315359.8
• 申請日: 2021-03-24
• 公開（公告）號: CN113069538B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 陳克平;樊釩;劉冬;朱沖;張仁懷;高婧;杜洪波;楊鑒芹;江之永;吳畏;陳傳鳳
• 申請（專利權）人: 成都歐林生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K39/085
• 分類號: A61K39/085;A61P31/04;A61P11/00;C07K14/31;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218
• 代理人: 袁英

1.一種制備重組金黃色葡萄球菌疫苗的方法，其特征在于：包括下述步驟：

S1、將疫苗抗原組分HI蛋白原液、SpA5蛋白原液、mSEB蛋白原液及MntC蛋白原液混合，得到蛋白原液混合液；

所述HI蛋白原液的制備包括下述步驟：

（1）菌體破碎

將HI菌體用緩沖液溶解，然后破菌、離心，收集上清液；所述緩沖液為18-22mM?的PB緩沖液，所述緩沖液的pH為?5.8-6.2；所述菌體與緩沖液的比例為1:9-11，所述菌體以kg計，所述緩沖液以L計；

（2）酶切

應用PP酶溶液對步驟（1）中的收集的上清液進行酶切；

所述上清液與PP酶溶液的體積比為55-65:1；將上清液與PP酶溶液混合均勻后在2～8℃保溫酶切3～4h；

（3）澄清過濾

將步驟（2）酶切后的菌液調節pH至6.4-6.6，然后將上清使用Cobetter?0.6～0.8μm或Pall?PDH4深層濾板進行澄清過濾，收集過濾液；

（4）SPFF柱層析

采用GE?SPFF填料裝填層析柱，對步驟（3）收集的過濾液進行初純，得到HI蛋白SPFF洗脫液；

（5）SPHP柱層析

采用GE?SPHP填料裝填層析柱，對步驟（4）得到的HI蛋白SPFF洗脫液進行中度純化，得到HI蛋白SPHP層析洗脫液；

（6）Phenyl?HP柱層析

采用GE?phenyl?HP填料裝填層析柱，對步驟（5）得到的HI蛋白SPHP層析洗脫液進行精細純化，得到HI蛋白phenyl?HP洗脫液；

（7）G25柱層析

采用G25層析柱對步驟（6）得到的HI蛋白phenyl?HP洗脫液進行脫鹽換液，得到HI蛋白G25層析液；

（8）Q?HP柱層析

采用Q?HP層析柱對步驟（7）得到的HI蛋白G25層析液進行層析，得到HI蛋白Q?HP流穿液；

（9）原液制備

將步驟（8）得到的HI蛋白Q?HP流穿液進行除菌過濾，得到HI原液；

所述SpA5蛋白原液和MntC蛋白原液的制備方法順次包括下述步驟：

（1）菌體破碎

將SpA5菌體或MntC菌體用緩沖液溶解，然后破菌、離心，收集上清液；

（2）澄清過濾

將步驟（1）收集的上清液使用Cobetter?0.6～0.8μm或Pall?PDH4深層濾板進行澄清過濾，收集過濾液；

（3）SPFF柱層析

采用GE?SPFF填料裝填層析柱，對步驟（2）收集的過濾液進行初純，得到SPFF洗脫液；

（4）酶切

應用PP酶溶液對步驟（3）中得到SPFF洗脫液進行酶切；

（5）SPHP柱層析

采用GE?SPHP填料裝填層析柱，對步驟（4）酶切后的酶切液進行中度純化，得到SPHP層析洗脫液；

（6）Phenyl?HP柱層析

采用GE?phenyl?HP填料裝填層析柱，對步驟（5）得到的SPHP層析洗脫液進行精細純化，得到SpA5蛋白phenyl?HP洗脫液或MntC蛋白phenyl?HP流穿液；

（7）G25柱層析

采用G25層析柱對步驟（6）得到的SpA5蛋白phenyl?HP洗脫液或MntC蛋白phenyl?HP流穿液進行脫鹽換液，得到G25層析液；

（8）Q?HP柱層析

采用Q?HP層析柱對步驟（7）得到的G25層析液進行層析，得到Q?HP流穿液；

（9）原液制備

將步驟（8）得到的Q?HP流穿液進行除菌過濾，得到SpA5蛋白原液或MntC蛋白原液；

S2、將步驟S1得到蛋白原液混合液使用疫苗稀釋液稀釋至疫苗各抗原組分濃度均為90-110μg/ml，得到蛋白原液稀釋液；

S3、使用疫苗稀釋液稀釋磷酸鋁溶液至鋁元素濃度為1.4-1.5mg/ml，得到佐劑稀釋液；

S4、將步驟S2得到的蛋白原液稀釋液和步驟S3得到的佐劑稀釋液混合，在室溫密閉吸附后得到疫苗半成品；

S5、將步驟S4得到的半成品檢測合格后進行成品分裝和包裝。