[發明專利]AAV介導的人脂蛋白脂酶肝臟異位表達載體及其用途

在審

• 申請號: 202110309467.4
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN115109788A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 吳小兵;劉國慶;李維勤;馬思思;郭夢夢;董小巖
• 申請（專利權）人: 北京錦籃基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/864;C12N9/18;A61K48/00;A61P1/18;A61P3/06
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 胡志君;黃革生

本發明涉及優化的人脂蛋白脂酶基因表達框以及包含所述優化的人脂蛋白脂酶基因表達框的病毒載體，例如，重組腺相關病毒載體。本發明還涉及所述病毒載體作為基因藥物，通過靜脈注射，在肝臟特異性表達人脂蛋白脂酶(例如，LPL?S447X)來預防和/或治療嚴重高甘油三酯血癥或由其引起的疾病如急性胰腺炎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域。具體地，本發明涉及一種攜帶優化的人脂蛋白脂酶基因表達框的重組腺相關病毒載體。通過靜脈注射本發明的重組腺相關病毒載體，能夠獲得脂蛋白脂酶的肝臟特異性表達，由此預防和/或治療嚴重高甘油三酯血癥或由其引起的疾病如急性胰腺炎。

背景技術

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是水解血漿甘油三酯(triglyceride，TG)的關鍵酶,該酶功能障礙可使血漿乳糜微粒、極低密度脂蛋白等富含甘油三酯的脂蛋白(triglyceride-rich lipoprotei，TRL)增高，臨床表現為乳糜微粒/及低密度脂蛋白血癥,血漿甘油三酯升高。

與LPL密切相關的是糖基磷脂酰肌醇錨定的高密度脂蛋白結合蛋白1(glycosylphosphatidylinositol anchored high density lipoprotein bindingprotein 1，GPIHBP1)。GPIHBP1位于肌肉和脂肪組織的血管內皮細胞上，能夠從血管內皮的基底間隙與來自肌肉細胞和脂肪細胞的LPL結合，并將其轉運至毛細血管腔面，在血管腔內為LPL提供附著位點，使得LPL能夠水解血漿中TRL上的甘油三酯。GPIHBP1與LPL的結合還能夠使LPL保持結構穩定和較高的催化活性。GPIHBP1缺陷會使得LPL無法轉運至毛細血管腔發揮水解TRL上TG的作用，造成嚴重的高甘油三酯血癥(Stephen G Young等人，CellMetab.2019；30(1):51-65)。

現有技術中報導了通過肌肉注射重組AAV1病毒載體(所述AAV1是肌肉靶向性高的腺相關病毒載體)介導的人LPL-S447X表達能夠有效治療LPL基因缺陷小鼠，具有良好的安全性，可長期(約1年)降低血漿甘油三酯，呈劑量依賴性(Ross CJ等人，Hum GeneTher.2012；15(9):906-919)。Carpentier等人發現肌肉注射AAV1-LPL-S447X可降低LPL基因缺陷患者餐后乳糜微粒水平(Carpentier AC等人，J Clin Endocrinol Metab.97(5):1635-1644)。Stroes等人向LPL基因缺陷患者腿部肌肉注射兩種劑量的攜帶人LPL-S447X基因的腺相關病毒載體(1×10¹¹vg/kg和3×10¹¹vg/kg)，12周后檢測甘油三酯水平,結果表明，與治療前相比較，甘油三酯水平分別降低27％、41％，26-36周后,在患者肌肉勻漿中檢測到有活性的LPL蛋白，無任何不良反應出現(Stroes ES等人，Arterioscler Thromb VascBiol.2018.28(12):2303-2304)。Gaudet等對14例LPL基因缺陷型HTG-AP患者通過肌肉注射施用AAV1-LPL-S447X進行基因治療，患者血漿甘油三酯在12周下降到40％，經過2年臨床觀察無高甘油三酯血癥性胰腺炎(hypertriglyceridemic acute pancreatitis,HTG-AP)復發和嚴重不良反應(Glancy D等人，Gene Ther.2013.20(4):361-369)。鑒于前期臨床研究結果證實了該基因治療方法的安全性和有效性，2012年，歐洲藥品局(EMA)批準了西方國家第一個基因治療藥物Alipogene Tiparvovec(商品名：Glybera)，該藥的適應癥為：嚴格限制脂肪飲食后仍然發生嚴重或反復HTG-AP的LPL基因缺陷患者。