[發(fā)明專利]AAV介導(dǎo)的人脂蛋白脂酶肝臟異位表達(dá)載體及其用途

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110309467.4
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN115109788A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳小兵;劉國慶;李維勤;馬思思;郭夢夢;董小巖
• 申請（專利權(quán)）人: 北京錦籃基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/864;C12N9/18;A61K48/00;A61P1/18;A61P3/06
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 胡志君;黃革生

1.一種優(yōu)化的人脂蛋白脂酶基因表達(dá)框，其包含：

(1)如SEQ ID NO:5所示的啟動子序列或者與其具有至少約90％同一性的啟動子序列；

(2)插入有SEQ ID NO:2所示的內(nèi)含子序列或者插入有與SEQ ID NO:2具有至少約90％同一性的內(nèi)含子序列的編碼功能性脂蛋白脂酶(例如，LPL-S447X)的核苷酸序列，例如，

(i)如SEQ ID NO:3所示的優(yōu)化的編碼LPL-S447X的核苷酸序列；

(ii)與如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列；

(iii)與(i)或(ii)的核苷酸序列編碼相同的LPL-S447X，但因遺傳密碼的簡并性而與(i)或(ii)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或

(iv)與(i)或(ii)或(iii)所述核苷酸序列具有至少70％同一性的序列；和

(3)至少一個(例如，2－8個)SEQ ID NO:6所示的人miR-142-3p靶序列，例如，具有4個串聯(lián)的人miR-142-3p靶序列，例如，SEQ ID NO:7所示的人miR-142-3p靶序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)化的人脂蛋白脂酶基因表達(dá)框，其還包含：

(4)如SEQ ID NO:10所示的或者與其具有至少約90％同一性的BGH polyA序列；和/或

(5)如SEQ ID NO:11所示的或者與其具有至少約90％同一性的TBG增強(qiáng)子序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因表達(dá)框，其堿基全序列如SEQ ID NO:12所示或與SEQ IDNO:12具有至少約90％同一性，特征在于，表達(dá)框表達(dá)產(chǎn)物為LPL-S447X。

4.一種病毒載體，其特征在于，包含權(quán)利要求1－3中任一項所述的優(yōu)化的人脂蛋白脂酶基因表達(dá)框。

5.一種用于預(yù)防和/或治療嚴(yán)重高甘油三酯血癥或其引起的疾病如急性胰腺炎的基因藥物，特征在于，

(1)該基因藥物是一種病毒載體；

(2)該病毒載體包含權(quán)利要求1－3中任一項所述的優(yōu)化的人脂蛋白脂酶基因表達(dá)框；和

(3)將該基因藥物靜脈注射，通過肝臟特異性表達(dá)人脂蛋白脂酶(例如，LPL-S447X)來達(dá)到預(yù)防和/或治療嚴(yán)重高甘油三酯血癥或其引起的疾病如急性胰腺炎的目的，

例如，所述嚴(yán)重高甘油三酯血癥或其引起的疾病如急性胰腺炎是LPL基因缺陷和/或GPIHBP1基因缺陷和/或高脂飲食誘發(fā)的。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的病毒載體或根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因藥物，其特征在于，

(1)所述病毒載體是重組腺相關(guān)病毒載體；和/或

(2)所述病毒載體的基因組可自我互補(bǔ)形成雙鏈DNA分子。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的病毒載體或基因藥物，其特征在于，所述重組腺相關(guān)病毒載體是選自AAV1、AAV2、AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh.10或它們的組合的血清型的重組腺相關(guān)病毒載體，優(yōu)選的血清型為AAV5、AAV3B、AAV8、AAV9。

8.根據(jù)權(quán)利要求1－3中任一項所述的優(yōu)化的人脂蛋白脂酶基因表達(dá)框和根據(jù)權(quán)利要求4、6和7中任一項所述的病毒載體的用途，用于制備預(yù)防和/或治療高甘油三酯血癥或其引起的疾病如急性胰腺炎的基因藥物，例如，用于制備預(yù)防和/或治療LPL基因缺陷和/或GPIHBP1基因缺陷和/或高脂飲食誘發(fā)的高甘油三酯血癥或其引起的疾病如急性胰腺炎的基因藥物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述基因藥物的給藥方式為靜脈注射，所述高甘油三酯血癥是LPL基因缺陷和/或GPIHBP1基因缺陷和/或高脂飲食引起的高甘油三酯血癥。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述基因藥物的一次給藥可持續(xù)降低體內(nèi)的血漿TG濃度，由此預(yù)防和/或治療高甘油三酯血癥，特別地，預(yù)防和/或治療嚴(yán)重的高甘油三酯血癥。