[發明專利]一種基于超高效液相色譜-質譜法同時檢測動物飼料中七種鏈格孢霉毒素的方法

在審

• 申請號: 202110309428.4
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113075315A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 劉翻;周小玲;王曉芬;萬益群;郭嵐
• 申請（專利權）人: 南昌大學;塔里木大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南昌恒橋知識產權代理事務所(普通合伙) 36125
• 代理人: 楊志宇

本發明公開了一種同時檢測動物飼料中七種鏈格孢霉毒素（細交鏈格孢菌酮酸、交鏈孢酚、交鏈格孢酚單甲醚、交鏈孢烯、格孢毒素I、騰毒素、AAL Toxin TA1）的超高效液相色譜?質譜分析方法（UHPLC?MS）。鏈格孢霉是飼料霉變的重要病原菌之一，產生的毒素不僅嚴重危害人類健康和畜禽生產安全，也造成了相應的經濟損失。本發明采用簡便的液?液萃取方法，結合UHPLC?MS分析技術，提供了一種動物飼料中七種鏈格孢霉毒素同時檢測的分析新方法，儀器檢出限在0.12~1.40 ng/mL范圍內，為今后飼料的生產、儲存和使用過程中其質量監管提供了有效手段。

技術領域

本發明涉及一種基于超高效液相色譜-質譜法同時檢測動物飼料中細交鏈格孢菌酮酸（TEA）、交鏈孢酚（AOH）、交鏈格孢酚單甲醚(AME)、交鏈孢烯(ALT)、格孢毒素 I(ATT-I)、騰毒素(TEN)、AAL Toxin TA1(TA-1)等七種鏈格孢霉毒素的方法，屬于分析技術領域。

背景技術

據聯合國糧農組織統計，全球每年由于霉菌污染飼料所造成的經濟損失達近千億元。我國是霉菌毒素污染最嚴重的國家之一，每年因飼料霉變導致的直接經濟損失在100億元以上。反芻動物每年消耗的數百萬噸飼料，包括新鮮牧草、干草、秸稈、飼用谷物、青貯飼料等，均可在收獲前或貯藏過程中感染霉菌毒素。鏈格孢霉是飼料霉變的重要病原菌之一，產生的毒素不僅嚴重危害人類健康和畜禽生產安全，也造成了相應的經濟損失。

鏈格孢霉毒素主要包括交鏈格孢毒素（ATX）、交鏈格孢酚(AOH) 、交鏈格孢酚單甲醚(AME) 、交鏈孢烯(ALT) 和細交鏈格孢菌酮酸(TeA) 等。目前，我國已制定飼料中黃曲霉毒素B1，赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2毒素和伏馬毒素的限量標準，但缺乏鏈格孢霉毒素的限量標準。鏈格孢霉毒素現用的檢測方法有薄層色譜分析、液相色譜法、氣相色譜、氣相色譜與質譜聯用儀，超高效液相色譜-串聯質譜法和競爭酶聯免疫吸附法等，但是這些方法適用基質不包含飼料，而且檢測種類較少。因此，有必要建立飼料中鏈格孢霉毒素的快速、簡便、靈敏分析新技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速、簡便、靈敏的動物飼料中細交鏈格孢菌酮酸（TEA）、交鏈孢酚（AOH）、交鏈格孢酚單甲醚(AME)、交鏈孢烯(ALT)、格孢毒素 I(ATT-I)、騰毒素(TEN)、AAL Toxin TA1(TA-1)等七種鏈格孢霉毒素的同時檢測新方法。

本發明的技術方案：一種基于超高效液相色譜-質譜法實現動物飼料中七種鏈格孢霉毒素（TEA，AOH，AME，ALT，ATT-I，TEN，TA-1）同時測定的分析方法。飼料中七種鏈格孢霉毒素用乙腈（含2%乙酸）溶液室溫下超聲提取，用超高效液相色譜-質譜法測定。

本發明主要包括以下幾個步驟：超高效液相色譜-質譜條件；七種鏈格孢霉毒素（TEA，AOH，AME，ALT，ATT-I，TEN，TA-1）標準溶液的檢測；樣品的預處理；樣品的檢測。

一種基于超高效液相色譜-質譜法同時檢測動物飼料中七種鏈格孢霉毒素（TEA，AOH，AME，ALT，ATT-I，TEN，TA-1）的分析方法，其特征在于：主要包括以下幾個步驟：

（1）超高效液相色譜-質譜條件

本發明中所使用的儀器是超高效液相色譜-質譜聯用儀，包括LC30草高效液相色譜系統（島津，日本）和Triple TOF 5600+（AB Sciex，美國）質譜儀，色譜條件：色譜條件：色譜柱：Shim-pack GIST C18柱（2.1×75 mm，2.0 μm）；柱溫：30 ℃；進樣量：5 μL。流動相：A相為含0.1 %甲酸-水，B相為乙腈；流速：0.3 mL/min；梯度洗脫程序見表1。質譜條件：離子源：ESI源；正離子模式；離子源電壓：5500V；氣簾氣（CUR gas）35 psi；霧化氣（GAS 1）50psi；輔助氣（GAS 2）50 psi；離子源溫度550 ℃；采集方式：選擇離子掃描模式，具體條件見表2。