[發明專利]一種基于超高效液相色譜-質譜法同時檢測動物飼料中七種鏈格孢霉毒素的方法

在審

• 申請號: 202110309428.4
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113075315A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 劉翻;周小玲;王曉芬;萬益群;郭嵐
• 申請（專利權）人: 南昌大學;塔里木大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南昌恒橋知識產權代理事務所(普通合伙) 36125
• 代理人: 楊志宇

1.一種基于超高效液相色譜-質譜法同時檢測動物飼料中七種鏈格孢霉毒素的分析方法，其特征在于：主要包括以下幾個步驟：

（1）超高效液相色譜-質譜條件；

（2）七種鏈格孢霉毒素（細交鏈格孢菌酮酸、交鏈孢酚、交鏈格孢酚單甲醚、交鏈孢烯、格孢毒素 I、騰毒素、AAL Toxin TA11）標準溶液的檢測；

（3）樣品的前處理；

（4）樣品的檢測。

2.一種基于超高效液相色譜-質譜法同時檢測動物飼料中七種鏈格孢霉毒素的分析法，其特征在于：主要包括以下幾個步驟：

（1）超高效液相色譜-質譜條件

本發明中所使用的儀器是超高效液相色譜-質譜聯用儀，包括LC30草高效液相色譜系統（島津，日本）和Triple TOF 5600+（AB Sciex，美國）質譜儀，色譜條件：色譜條件：色譜柱：Shim-pack GIST C18柱（2.1×75 mm，2.0 μm）；柱溫：30 ℃；進樣量：5 μL；流動相：A相為含0.1 %甲酸-水，B相為乙腈；流速：0.3 mL/min；梯度洗脫程序見表1；質譜條件：離子源：ESI源；正離子模式；離子源電壓：5500V；氣簾氣（CUR gas）35 psi；霧化氣（GAS 1）50 psi；輔助氣（GAS 2）50 psi；離子源溫度550 ℃；采集方式：選擇離子掃描模式，具體條件見表2：

（2）七種鏈格孢霉毒素標準溶液的檢測

本發明采用外標法進行定，用乙腈配置一系列質量濃度的細交鏈格孢菌酮酸、交鏈孢酚、交鏈格孢酚單甲醚、交鏈孢烯、格孢毒素 I、騰毒素和AAL Toxin TA1混合標準工作溶液，在上述色譜-質譜條件下進行分析，以峰面積（y）對分析物濃度（x）進行線性回歸，得到線性回歸方程，TEA、AOH、AME在5-500ng/mL，ALT、ATT-I、TEN和TA-1咋0.5-100ng/mL范圍內具有良好的線性關系（R²0.997），LOD和LOQ分別在0.12-1.40ng/mL和0.39-4.66ng/mL范圍內；

（3）樣品的前處理

準確稱取稱取0.2-0.5g樣品（食品粉碎機粉碎），加入4mL乙腈（含2%乙酸）溶液，震蕩混勻，室溫下超聲提取30分鐘；再加入0.2g NaCl，震蕩2分鐘；10000 轉/分鐘離心10分鐘；上清液用0.22μm有機相濾膜過濾即得上機溶液：

（4）樣品的檢測

準確稱取0.2-0.5g樣品，分別添加三個不同濃度水平的鏈格孢霉毒素混合標準溶液，按上述樣品前處理方法對樣品進行處理后，進行UHPLC-MS分析，計算樣品加標回收率。