[發明專利]一種用于抗CTLA-4單克隆抗體生物學活性檢測的RGA方法及其應用

有效

• 申請號: 202110308027.7
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113009157B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 王蘭;劉春雨;于傳飛;楊雅嵐;崔永霏;段茂芹;俞小娟;徐苗;王軍志
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;C12Q1/66;C12N5/10;C12N15/13;C12N15/12;C12N15/65
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 李紅偉;孟祥斌

1.一種用于抗CTLA-4單克隆抗體生物學活性檢測的RGA方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1) 構建靶細胞和效應細胞；

(2) 將靶細胞懸液和效應細胞懸液按照一定的比例進行混合得到混合液；

(3) 將抗CTLA-4單克隆抗體藥物樣品及參比品等比例稀釋，將稀釋后的抗體分別轉移至步驟(2)中的混合液中，孵育培養；

(4) 向步驟(3)中加入熒光素酶底物，根據信號值擬合四參數曲線確定抗體的生物學活性；

所述構建的靶細胞為穩定表達CD3 scFv的Raji細胞；

所述構建的效應細胞為穩定表達CTLA-4基因和報告基因的Jurkat細胞。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，制備的靶細胞懸液的細胞密度為6×10⁵個/mL。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述報告基因為熒光素酶報告基因。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述熒光素酶報告基因為由NFAT應答元件驅動表達的熒光素酶報告基因。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，制備的效應細胞懸液的細胞密度為6×10⁶個/mL。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，抗CTLA-4單克隆抗體等比例稀釋的比例為1:3-1:5。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，抗CTLA-4單克隆抗體等比例稀釋的比例為1:4。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，孵育培養時間為4-7h。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，孵育培養時間為6h。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述效應細胞和靶細胞的比例為2:1-25:1。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述效應細胞和靶細胞的比例為10:1。

12.一種用于抗CTLA-4單克隆抗體藥物生物學活性評價的組合物，其特征在于，所述組合物包括如下組分：

(1) 穩定表達CD3 scFv的Raji靶細胞，穩定表達CTLA-4基因和報告基因的Jurkat效應細胞；

(2) 抗CTLA-4單克隆抗體藥物樣品和參比品；

(3) 熒光素酶底物。

13.根據權利要求12所述的組合物，其特征在于，所述報告基因為熒光素酶報告基因。

14.根據權利要求13所述的組合物，其特征在于，所述熒光素酶報告基因為由NFAT應答元件驅動表達的熒光素酶報告基因。

15.權利要求1-11任一項所述的方法在制備評價抗CTLA-4單克隆抗體藥物生物學活性的工具中的應用；

所述工具包括產品、裝置。

16.權利要求12-14任一項所述的組合物在制備評價抗CTLA-4單克隆抗體藥物生物學活性的工具中的應用；

所述工具包括產品、裝置。