[發(fā)明專利]牙髓干細胞外泌體制劑及制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110307944.3
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113041259B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李滿起;陳麗平
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱科技實業(yè)開發(fā)有限公司
• 主分類號: A61K35/32
• 分類號: A61K35/32;A61P15/10;C12N5/0775
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務所 11313
• 代理人: 郗名悅;閆茂娟

1.牙髓干細胞外泌體制劑在制備用于治療勃起功能障礙的試劑中的應用，其中，所述制劑由牙髓干細胞來源的外泌體以及藥學上可接受的載體構(gòu)成，所述制劑的制備方法具體包括以下步驟：

（1）從離體的牙齒中獲取牙髓組織；

（2）消化：于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)步驟（1）所獲取的牙髓組織并進一步通過消化液進行消化，所述消化液包括質(zhì)量濃度為0.25%的胰蛋白酶溶液；

（3）牙髓干細胞培養(yǎng)：待所述牙髓組織的細胞脫離培養(yǎng)瓶的瓶壁，細胞由梭形變?yōu)閳A形時加入第三培養(yǎng)液終止消化，將終止消化的所述牙髓組織離心，丟棄上清，進一步將棄掉上清的牙髓組織用第一培養(yǎng)液重懸并進行培養(yǎng)和傳代，待細胞匯合至80-90%后進行所述傳代，獲得包含牙髓干細胞的第二培養(yǎng)液；

（4）培養(yǎng)液收集：收集所述第二培養(yǎng)液；

（5）外泌體分離：對所述第二培養(yǎng)液進行離心操作以得到牙髓干細胞外泌體制劑，

所述第一和第三培養(yǎng)液均選自添加有體積濃度為10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，其中，所述胎牛血清需要提前去掉血清中的外泌體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其中，步驟（3）中，

所述離心的條件為：在800xg的離心力下于室溫離心8-10min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其中，步驟（3）中，在CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)所述棄掉上清的牙髓組織，所述CO₂培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件為：溫度為37℃、CO₂濃度為5%-7%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其中，步驟（5）中離心操作的具體步驟包括：

第一步，將收集的第二培養(yǎng)液以2000-3000g的離心力離心10-30min去掉細胞碎片得到I級溶液；

第二步，將所述I級溶液以20000-30000g的離心力離心30-60min去掉200-500nm的混合微囊泡得到II級溶液；

第三步，將所述II級溶液以120000-140000g的離心力離心70-150min，棄上清獲得外泌體；

第四步，使用生理鹽水溶解所述外泌體得到牙髓干細胞外泌體制劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其中，所述牙髓干細胞來自乳牙或11-20歲青少年牙齒。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其中，所述外泌體的直徑為30-200nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應用，所述外泌體在制劑中的濃度為1000-2000μg/mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其中，所述藥學上可接受的載體選自生理鹽水、PBS中的一種或兩種。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用，所述藥學上可接受的載體為生理鹽水。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其中，所述制劑選自注射劑、軟膏劑或噴霧劑中的一種。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應用，所述制劑為注射劑。