[發(fā)明專利]一種采用雙波長一測多評法測定銀翹散中7種成分含量的方法

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• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113075314A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 張會敏;宋健;李慶軍;曲新艷;鐘方曉;徐林
• 申請（專利權）人: 山東省中醫(yī)藥研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種采用雙波長一測多評法測定銀翹散中7種成分含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對照品溶液的制備：分別取新綠原酸、綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸A、異綠原酸C、連翹苷、牛蒡苷對照品，以甲醇為溶劑，配置成濃度分別為1～10、50～150、200～350、20～100、5～20、20～40、50～150μg/ml的混合對照品溶液；

（2）供試品溶液的制備：稱取待測銀翹散0.4～0.6g，用30～100%甲醇水溶液定容，超聲10～40min，補足失重，濾膜過濾，得供試品溶液；

（3）相對校正因子的計算：取步驟（1）中的對照品溶液，注入高效色譜儀中，以連翹酯苷A為內(nèi)參物，在檢測波長為237nm下，分別計算牛蒡苷和連翹苷的相對校正因子?_k/m；在檢測波長為327nm下，分別計算新綠原酸、綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C的相對校正因子?_k/m；

相對校正因子計算公式如下：

；

其中，A_k是內(nèi)參物對照品的峰面積；W_k是內(nèi)參物對照品的濃度；A_m是其它對照品的峰面積；W_m是其它對照品的質(zhì)量濃度；

（4）測定：取步驟（1）中的連翹酯苷A對照品溶液、步驟（2）中的供試品溶液，注入高效液相色譜儀中，記錄237nm下，連翹酯苷A、連翹苷、牛蒡苷的峰面積，327nm下，連翹酯苷A、新綠原酸、綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C的峰面積，結合步驟（3）得到的相對校正因子的計算連翹酯苷A、連翹苷、牛蒡苷、新綠原酸、綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C 7種成分的含量。

2.根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟（3）和步驟（4）中所述的高效液相色譜儀的色譜條件為：

檢測器：UV-DAD檢測器；色譜柱：C18柱，4.6×250 mm，5 μm；流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫；雙波長同時采集，流速：1ml/min；進樣量：3～15 μl；柱溫：25～35 ℃；分析時間：130min；

所述的梯度洗脫條件如下表所示：

。

3.根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟（1）中所述的混合對照品溶液中新綠原酸、綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸A、異綠原酸C、連翹苷、牛蒡苷濃度分別為7.7、96、296、65、15.2、27.5、113μg/ml。

4.根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟（2）中所述的供試品溶液的濃度為0.02g/ml。

5.根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟（2）中所述的待測銀翹散的取樣量為0.5g；所述的提取溶劑為50%甲醇水溶液，常溫超聲，超聲時間為30min。

6.根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟（2）中所述的微濾采用0.45μm有機系微孔濾膜。

7.根據(jù)權利要求2所述的測定方法，其特征在于，步驟（3）和步驟（4）中所述的C18色譜柱為Thermo Syncronis C18柱、Hypersil ODS-2 C18柱中的一種；所述的梯度洗脫條件如下表所示：

。

8.根據(jù)權利要求2所述的測定方法，其特征在于，步驟（3）和步驟（4）中所述的進樣量為5μl，色譜柱柱溫為30℃。

9.根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟（1）中的甲醇為50%色譜甲醇。