[發明專利]用于現場檢測布魯氏桿菌的通用型引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202110306954.5
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN112941212A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 張雪;白璐;尹新穎;樸永哲;劉冉
• 申請（專利權）人: 大連海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 大連瑞博晟知識產權代理有限公司 21259
• 代理人: 楊迪

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及用于現場快速檢測布魯氏桿菌的恒溫擴增技術的通用型引物組、試劑盒及方法。所述試劑盒包括用于現場檢測布魯氏桿菌的通用型引物組、恒溫擴增的反應體系、陽性對照和空白對照，所述陽性對照為含如SEQ ID NO.6所示序列的陽性質粒，所述空白對照為去核酸的超純水。本發明提供的試劑盒與檢測方法操作簡單，快速準確，特異性好，靈敏度高，基因型覆蓋全面，不會存在漏檢的可能性，適合規模性推廣和應用。

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及用于現場快速檢測布魯氏桿菌的恒溫擴增技術的通用型引物組、試劑盒及方法。

背景技術

布魯氏桿菌病(簡稱布病)是由布魯氏桿菌屬細菌感染導致人獸共患的傳染病，在全世界范圍內嚴重威脅人類健康并影響畜牧業發展。動物布病主要是由羊種布魯氏桿菌、牛種布魯氏桿菌和豬種布魯氏桿菌感染羊、牛和豬等動物呈急性或慢性疾病，是人布病的主要傳染來源。該病流行于世界各地，據調查全世界160個國家中有123個國家有布魯氏桿菌病發生。我國多見于內蒙、東北，西北等牧區。

由于布病的癥狀缺少特異性、潛伏期長(一般為14d～180d)，故而漏診、誤診率較高，如治療不及時可引發慢性炎癥，長期危害患者健康。因此，早期診治具有重要意義。目前，國內外報道的布魯氏桿菌檢測方法主要有血清學方法和分子生物學方法。血清學方法靈敏度高、檢測快速、操作簡便且價格合理，常用于布魯氏桿菌病的初篩和監測，但其前期病原菌培養易對實驗人員造成污染并且結果由實驗人員觀察所得，受人為因素干擾較大，且對實驗人員有較高的感染風險，因此更加安全的分子生物學檢測方法近年來應用廣泛。Liu等建立了一種常規PCR方法檢測布魯氏桿菌，該方法靈敏度與特異性較低，操作繁瑣，無法用于現場檢測。杜琳等建立了生鮮乳中布魯氏桿菌的多重PCR檢測方法，但是該方法靈敏度只能達到1×10⁵cfu/mL，較單一PCR檢測方法靈敏度有所下降且同樣不適用于現場檢測。張太翔等建立了一種快速鑒定牛布氏桿菌的TaqMan實時熒光定量PCR方法，該方法具有靈敏度高、特異性好的特性，但對實驗人員、實驗室均有較高要求，不適用于現場快速檢測。布魯氏桿菌傳染性極強，因此建立適合現場快速檢測的檢測方法對于阻斷布魯氏桿菌的傳播，降低二次傳播風險具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的上述不足，提供用于檢測布魯氏桿菌通用型的引物組、試劑盒及方法。該引物組可特異、靈敏擴增布魯氏桿菌，該檢測方法操作簡單、快速準確、特異性好、靈敏度高、覆蓋布魯氏桿菌常見的牛、樣、豬、犬生物型，不會存在漏檢的可能性。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：用于現場檢測布魯氏桿菌的通用型引物組，其特征在于，所述引物組由下述引物組成：

Bru-OF CCCGACTTGATCGCATTGA SEQ ID No.1；

Bru-OB CGTTGGGAGCGAGCTTTG SEQ ID No.2；

Bru-IF ATTTCCGGCGCAGGCGAAAATATTGGCAACCGAGCCATTC SEQ ID No.3；

Bru-IB

TTCGCGATCAGACCACCAATCGTTTTTCCGTATCGGCACTGG SEQ ID No.4；

Bru-LB GATAATAGGTTCCGGCTGTGC SEQ ID No.5。

一種用于現場檢測布魯氏桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括以下組成物：

(1)用于現場檢測布魯氏桿菌的通用型引物組：

Bru-OF CCCGACTTGATCGCATTGA SEQ ID No.1；

Bru-OB CGTTGGGAGCGAGCTTTG SEQ ID No.2；