[發明專利]一種鵝星狀病毒的滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 202110306946.0
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN112999343B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 姚倫廣;冀君;劉陽坤;許鑫;胡小敏
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺

本發明涉及一種鵝星狀病毒的滅活疫苗及其制備方法，以分離獲得的一株毒力強、免疫性能好的鵝星狀病毒N?GoAstV?190123株為抗原，將該毒株制備成滅活疫苗免疫后能夠產生較高的中和抗體，對鵝群能夠達到全部保護。

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，主要涉及疫苗的生產，具體涉及一種鵝星狀病毒滅活疫苗及其制備方法。

背景技術：

近年來，山東、江蘇及安徽等地區養鵝場暴發了一種以痛風為主要癥狀的致死性傳染病，已有數位學者報道了相關病例，經研究發現導致此次疫情發生的致病原為鵝星狀病毒。特別是2017年以來，雛鵝痛風病迅速傳遍全國，給我國的養鵝業帶來了巨大的經濟損失，嚴重威脅我國養鵝業的發展。鵝星狀病毒是禽星狀病毒屬成員，屬于 ＲNA 病毒，鵝感染星狀病毒后表現為腹瀉、關節炎及生長障礙，發生較重的致死性肝炎、膽囊炎及腎炎等疾病。2~25 日齡雛鵝發病率較高，15 日齡以內雛鵝最易感，死亡率一般為 15%~36%，最高可達 50%。由于禽星狀病毒可擁有多個宿主，能夠水平、垂直、跨種傳播；同時禽星狀病毒基因重組、適應新宿主的能力和新型禽星狀病毒強毒株的不斷發現，使得感染禽星狀病毒的禽群凈化異常困難。此外，禽星狀病毒較強的理化因子抵抗力，對被禽星狀病毒污染的環境消毒十分困難。目前，針對禽星狀病毒還沒有市場化的特異性藥物和疫苗。體外適宜增殖細胞系的缺乏，導致可防控禽星狀病毒感染的弱毒或滅活疫苗相對較少，更未有商品化的鵝星狀病毒疫苗類產品。

現有技術中報道了多種疫苗的研發，例如榮雪路等研發和驗證了鵝星狀病毒重組Capsid蛋白亞單位疫苗的免疫效果，研究結果表明鵝星狀病毒重組 Capsid 蛋白亞單位疫苗免疫效果良好，能有效預防鵝星狀病毒的感染；專利文獻CN110699331A報道了一種鵝星狀病毒弱毒的制備方法及應用，其采用采用高溫處理和低溫孵育相結合的方法致弱病毒，用于制備疫苗可有效的預防鵝星狀病毒引起的鵝痛風病，然而，鵝星狀病毒疫苗的研究仍然較少，基于目前鵝星狀病毒在養殖場不斷蔓延，導致的經濟損失越來越大，因而，亟需研制安全有效的疫苗以及預防和治療鵝星狀病毒用的卵黃抗體和藥物等，以對鵝星狀病毒疫情進行有效的控制，避免養殖業的經濟損失。

發明內容：

為了解決現有技術中鵝星狀病毒感染的治療手段有限，沒有有效疫苗的技術問題，本發明旨在提供一種鵝星狀病毒滅活疫苗及其制備方法，該疫苗能夠刺激產生較高濃度的中和抗體，攻毒試驗表明其能實現100%保護，免疫保護效力高。

為解決以上技術問題，本發明采用如下技術手段：

一種鵝星狀病毒滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗鵝星狀病毒N-GoAstV-190123株經滅活后制備得到，其中所述鵝星狀病毒N-GoAstV-190123株在中國典型培養物保藏中心CCTCC進行用于專利程序的培養物的保藏，其保存號為：CCTCC No：V202068，分類命名為鵝星狀病毒 Goose astrovirus；保藏日期為2020年10月14日；保藏地址為：湖北省武漢市武漢大學保藏中心。

所述滅活疫苗還包括佐劑。

優選的，所述佐劑為Montanide ISA 206佐劑。

本發明還請求保護所述鵝星狀病毒滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

步驟一，取鵝星狀病毒N-GoAstV-190123毒種用稀釋液稀釋，稀釋至ELD₅₀為5×10^5.00/mL，經絨毛尿囊膜途徑接種8～10日齡SPF鵝胚，每胚0.2ml，接種后置37℃繼續孵育，不必翻蛋；

步驟二，SPF鵝胚接種后，每日照蛋3次，將在24小時前死亡的鵝胚棄去，24小時以后死亡的鵝胚隨時取出，至72小時，將活胚全部取出，氣室向上直立，置于4℃冷卻12小時；