[發明專利]一種鵝星狀病毒的滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 202110306946.0
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN112999343B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 姚倫廣;冀君;劉陽坤;許鑫;胡小敏
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺

1.一種鵝星狀病毒滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗是由高致病性鵝星狀病毒N-GoAstV-190123株經滅活后制備得到，其中所述鵝星狀病毒N-GoAstV-190123株在中國典型培養物保藏中心CCTCC進行用于專利程序的培養物的保藏，其保存號為：CCTCC No：V202068，分類命名為鵝星狀病毒 Goose astrovirus；保藏日期為2020年10月14日；保藏地址為：湖北省武漢市武漢大學保藏中心，所述鵝星狀病毒N-GoAstV-190123株是從病死雛鵝中分離得到的。

2.根據權利要求1所述的鵝星狀病毒滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗還包括佐劑，所述佐劑為Montanide ISA 206佐劑。

3.根據權利要求1所述的鵝星狀病毒滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗是通過皮下注射進行免疫接種。

4.根據權利要求2所述的鵝星狀病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟：步驟一，取高致病性鵝星狀病毒N-GoAstV-190123毒種用稀釋液稀釋，稀釋至ELD₅₀為5×10^5.00/mL，經絨毛尿囊膜途徑接種8～10日齡SPF鵝胚，每胚0.2mL，接種后置37℃繼續孵育，不必翻蛋；步驟二，SPF鵝胚接種后，每日照蛋3次，將在24小時前死亡的鵝胚棄去，24小時以后死亡的鵝胚隨時取出，至72小時，將活胚全部取出，氣室向上直立，置于4℃冷卻12小時；步驟三，將冷卻12小時的鵝胚取出，表面消毒后，吸取鵝胚液，每20個鵝胚的胚液混合為一組，在收獲胚液的同時，應逐個檢查鵝胚，將胚液混濁不清、胎兒腐敗及有任何污染可疑的鵝胚棄去不用；步驟四，收獲后的胚液置于滅菌瓶中，通過離心機離心后，混合于一個儲存罐內，在無菌條件下用滅菌的二級預過濾柱濾過，除去病毒液的殘渣和其他雜質，同時取樣測定毒價，并采用生理鹽水稀釋調整胚液的ELD₅₀為5×10^5.00；步驟六，準確量取甲醛，用注射用水配制成10%的甲醛溶液，混合均勻，然后往鵝胚液加入甲醛溶液，隨加隨攪拌，充分混合，甲醛最終濃度為0.2%，而后將其倒到已滅菌的滅活罐內，37℃滅活24小時，期間不停攪拌，滅活24小時后取樣做無菌檢驗和滅活檢驗；步驟七，取滅活的病毒液加熱至30℃保溫，取等體積的Montanide ISA 206佐劑，倒入雙層夾套容器并將溫度保持在30℃，200r/min低速攪拌并逐漸將滅活病毒液加入，流速5L/min，待滅活病毒液全部加入后，提高攪拌速度至300r/min，30℃持續攪拌15分鐘，而后在持續300r/min高速攪拌的情況下冷卻至10℃以下，停止攪拌，將乳液在10℃以下靜置24小時，分裝并加蓋密封，4℃左右保存備用，制得鵝星狀病毒滅活疫苗。