[發明專利]副溶血性弧菌基因缺失弱毒株和重組副溶血性弧菌減毒活疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110305802.3
• 申請日: 2021-03-24
• 公開（公告）號: CN113061561B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 潘建義;高智超;查振中;查銀河
• 申請（專利權）人: 浙江洪晟生物科技股份有限公司;浙江理工大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A61K39/106;A61P31/04;C12R1/63
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1.一種副溶血性弧菌基因缺失弱毒株，其特征在于，所述的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株不含有tdhA、vcrD1和vcrD2基因；所述的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株還含有能在副溶血性弧菌基因缺失弱毒株外膜上高效表達lptD蛋白的重組載體；所述的能在副溶血性弧菌基因缺失弱毒株外膜上高效表達lptD蛋白的重組載體為pBBR1MCS-1-ompA-lptD。

2.根據權利要求1所述的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株，其特征在于，所述的tdhA基因如SEQ.ID.NO1所示；所述的vcrD1基因如SEQ.ID.NO2所示，所述的vcrD2基因SEQ.ID.NO3所示。

3.根據權利要求1所述的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株，其特征在于，所述的ompA的基因序列如SEQ.ID.NO4所示；所述的lptD的基因序列如SEQ.ID.NO5所示。

4.一種制備如權利要求1至3任一權利要求所述的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)敲除副溶血性弧菌tdhA、vcrD1和vcrD2基因，得到不含tdhA、vcrD1和vcrD2基因的副溶血性弧菌；

2)構建pBBR1MCS-1-ompA-lptD載體，并將載體轉移至步驟1)中的副溶血性弧菌中，篩選得到外膜上高效表達lptD蛋白的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株。

5.一種重組副溶血性弧菌減毒活疫苗，其特征在于，所述的疫苗含有權利要求1所述的副溶血性弧菌基因缺失弱毒株和藥學上可以接受的稀釋液。

6.根據權利要求5所述的活疫苗，其特征在于，所述的活疫苗中每頭份含有副溶血性弧菌基因缺失弱毒株的濃度為10⁸CFU。

7.根據權利要求5所述的活疫苗，其特征在于，所述的藥學上可以接受的稀釋液為過0.22μm濾膜的PBS緩沖液或過0.22μm濾膜的生理鹽水。