[發(fā)明專利]一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)方法及系統(tǒng)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110300111.4
• 申請(qǐng)日: 2021-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN112927216B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊坤巧;谷榮杰;程源
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州恩可醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G06T7/00
• 分類號(hào): G06T7/00;G06T7/13;G06T7/187;G06T7/62
• 代理公司: 廣州專理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44493
• 代理人: 鄧易偲

1.一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

S100，對(duì)免疫細(xì)胞樣本進(jìn)行染色；

S200，在免疫細(xì)胞樣本中的任意一個(gè)位置滴入靶細(xì)胞液,記放入靶細(xì)胞液的中心位置為L點(diǎn)；

S300，每間隔時(shí)間T采集免疫細(xì)胞樣本的顯微圖像或CCD圖像作為細(xì)胞活性圖像；其中，T的取值范圍為[10,300]秒；

S400，對(duì)細(xì)胞活性圖像進(jìn)行高斯濾波，進(jìn)行灰度化得到灰度圖像，并對(duì)灰度圖像進(jìn)行邊緣提取得到邊緣圖像；

S500，判斷邊緣圖像中邊緣線構(gòu)成的連通區(qū)域的數(shù)量是否小于等于1，如果小于等于1則跳轉(zhuǎn)到步驟S300進(jìn)行下一次監(jiān)測(cè)，如果大于1則跳轉(zhuǎn)到步驟S600；

S600，搜索邊緣圖像的各個(gè)連通區(qū)域，搜索各個(gè)連通區(qū)域的邊緣線上的各個(gè)像素點(diǎn)中距離L點(diǎn)的歐氏距離或馬氏距離最近的點(diǎn)，以歐氏距離或馬氏距離最小的點(diǎn)作為第一參考點(diǎn)，將第一參考點(diǎn)所在的邊緣線構(gòu)成的連通區(qū)域作為第一連通區(qū)域，記第一連通區(qū)域的面積為M；

S700，搜索邊緣圖像的各個(gè)連通區(qū)域，搜索面積大于M并且與第一連通區(qū)域存在交集的各個(gè)連通區(qū)域的邊緣線上的各個(gè)像素點(diǎn)中距離L點(diǎn)的歐氏距離或馬氏距離最近的點(diǎn)，以為歐氏距離或馬氏距離最小的點(diǎn)作為第二參考點(diǎn)，將第二參考點(diǎn)所在的邊緣線構(gòu)成的連通區(qū)域作為第二連通區(qū)域；

S800，如果M大于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值，則跳轉(zhuǎn)到步驟S300進(jìn)行下一次監(jiān)測(cè)；當(dāng)M小于或等于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值時(shí)，通過第一連通區(qū)域和第二連通區(qū)域判斷NK細(xì)胞活性的強(qiáng)弱的檢測(cè)結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)方法，其特征在于，在S100中，對(duì)免疫細(xì)胞樣本進(jìn)行染色的方法為：利用熒光染料對(duì)血液樣本進(jìn)行染色，并加入紅細(xì)胞裂解液或者溶血?jiǎng)┻M(jìn)行溶血去處紅細(xì)胞得到免疫細(xì)胞樣本，所述熒光染料為4',6-二脒基-2-苯基吲哚、異硫氰酸熒光素、增強(qiáng)型熒光蛋白、7-氨基放線菌素D中任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)方法，其特征在于，在S200中，所述靶細(xì)胞液中的靶細(xì)胞通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染使靶細(xì)胞特異性表達(dá)綠色熒光蛋白；靶細(xì)胞液的滴入量為免疫細(xì)胞樣本量的20分之一，所述靶細(xì)胞液中的靶細(xì)胞包括：K-562細(xì)胞、海拉細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞、非自身組織細(xì)胞、寄生蟲中任意一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)方法，其特征在于，在S800中，當(dāng)M小于或等于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值時(shí)，通過第一連通區(qū)域和第二連通區(qū)域判斷NK細(xì)胞活性的強(qiáng)弱的方法為：當(dāng)?shù)谝贿B通區(qū)域的面積大于或等于第二連通區(qū)域的0.2～0.5倍，則檢測(cè)結(jié)果為NK細(xì)胞活性低；當(dāng)?shù)谝贿B通區(qū)域的面積小于第二連通區(qū)域的0.2～0.5倍，并且當(dāng)?shù)谝贿B通區(qū)域包含于第二連通區(qū)域，即第一連通區(qū)域在第二連通區(qū)域的內(nèi)部，則檢測(cè)結(jié)果為NK細(xì)胞活性強(qiáng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)方法，其特征在于，在S800中，當(dāng)M小于或等于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值時(shí)，當(dāng)M小于或等于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值時(shí)，通過第一連通區(qū)域和第二連通區(qū)域判斷NK細(xì)胞活性的強(qiáng)弱的方法還可以為：

利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)與顯微圖像中第一連通區(qū)域在免疫細(xì)胞樣本中對(duì)應(yīng)的靶細(xì)胞液，得到靶細(xì)胞存活與死亡的比例，

當(dāng)比例小于3.9％時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為NK細(xì)胞活性強(qiáng)；

當(dāng)比例大于等于3.9％且小于等于19.5％時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為NK細(xì)胞活性一般；

當(dāng)比例大于19.5％時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為NK細(xì)胞活性弱。

6.一種NK細(xì)胞活性快速檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)包括：存儲(chǔ)器、處理器以及存儲(chǔ)在所述存儲(chǔ)器中并可在所述處理器上運(yùn)行的計(jì)算機(jī)程序，所述處理器執(zhí)行所述計(jì)算機(jī)程序運(yùn)行在以下系統(tǒng)的單元中：

細(xì)胞樣本染色單元，用于對(duì)免疫細(xì)胞樣本進(jìn)行染色；

靶細(xì)胞滴入單元，用于在免疫細(xì)胞樣本中的任意一個(gè)位置滴入靶細(xì)胞液,記放入靶細(xì)胞液的中心位置為L點(diǎn)；

活性圖像采集單元，用于每間隔時(shí)間T采集一次免疫細(xì)胞樣本的顯微圖像或CCD圖像作為細(xì)胞活性圖像；其中，T的取值范圍為[10,300]秒；

邊緣圖像提取單元，用于對(duì)細(xì)胞活性圖像進(jìn)行高斯濾波，進(jìn)行灰度化得到灰度圖像，并對(duì)灰度圖像進(jìn)行邊緣提取得到邊緣圖像；

連通區(qū)域判斷單元，用于判斷邊緣圖像中邊緣線構(gòu)成的連通區(qū)域的數(shù)量是否小于等于1，如果小于等于1則跳轉(zhuǎn)到活性圖像采集單元進(jìn)行下一次監(jiān)測(cè)，如果大于1則跳轉(zhuǎn)到靶細(xì)胞區(qū)定位單元；

靶細(xì)胞區(qū)定位單元，用于搜索邊緣圖像的各個(gè)連通區(qū)域，搜索各個(gè)連通區(qū)域的邊緣線上的各個(gè)像素點(diǎn)中距離L點(diǎn)的歐氏距離或馬氏距離最近的點(diǎn)，以歐氏距離或馬氏距離最小的點(diǎn)作為第一參考點(diǎn)，將第一參考點(diǎn)所在的邊緣線構(gòu)成的連通區(qū)域作為第一連通區(qū)域，記第一連通區(qū)域的面積為M；

NK細(xì)胞區(qū)定位單元，用于搜索邊緣圖像的各個(gè)連通區(qū)域，搜索面積大于M并且與第一連通區(qū)域存在交集的各個(gè)連通區(qū)域的邊緣線上的各個(gè)像素點(diǎn)中距離L點(diǎn)的歐氏距離或馬氏距離最近的點(diǎn)，以為歐氏距離或馬氏距離最小的點(diǎn)作為第二參考點(diǎn)，將第二參考點(diǎn)所在的邊緣線構(gòu)成的連通區(qū)域作為第二連通區(qū)域；

檢測(cè)結(jié)果生成單元，用于如果M大于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值，則跳轉(zhuǎn)到活性圖像采集單元進(jìn)行下一次監(jiān)測(cè)；當(dāng)M小于或等于設(shè)定的靶細(xì)胞液面積閾值時(shí)，通過第一連通區(qū)域和第二連通區(qū)域判斷NK細(xì)胞活性的強(qiáng)弱的檢測(cè)結(jié)果。