[發(fā)明專利]一種NK細(xì)胞活性快速檢測方法及系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110300111.4
• 申請日: 2021-03-22
• 公開（公告）號: CN112927216B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊坤巧;谷榮杰;程源
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州恩可醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G06T7/00
• 分類號: G06T7/00;G06T7/13;G06T7/187;G06T7/62
• 代理公司: 廣州專理知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44493
• 代理人: 鄧易偲

本發(fā)明公開了一種NK細(xì)胞活性快速檢測方法及系統(tǒng)，利用NK細(xì)胞主動(dòng)聚集到靶細(xì)胞附近進(jìn)行殺傷的特點(diǎn)，通過圖像處理方法快速的進(jìn)行光學(xué)識別，由靶細(xì)胞液一開始滴入免疫細(xì)胞樣本中初期靶細(xì)胞液進(jìn)行擴(kuò)散導(dǎo)致其在細(xì)胞活性圖像中對應(yīng)的第一連通區(qū)域逐漸變大，隨著免疫細(xì)胞樣本中的NK細(xì)胞被靶細(xì)胞所吸引聚集，大量殺傷靶細(xì)胞，導(dǎo)致后期靶細(xì)胞液在細(xì)胞活性圖像中對應(yīng)的第一連通區(qū)域的面積逐漸縮小，并對此根據(jù)顯微圖像進(jìn)行分析，根據(jù)分析結(jié)果對NK細(xì)胞的殺傷效力進(jìn)行評價(jià)檢測，即使在NK細(xì)胞數(shù)量基數(shù)大的時(shí)候，也不會提高檢測算法的時(shí)空復(fù)雜度，檢測精度高，能夠滿足快速、準(zhǔn)確檢測的要求，快速檢測得到NK細(xì)胞活性的結(jié)果。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開屬于計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)、細(xì)胞活性檢測計(jì)算技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種NK細(xì)胞活性快速檢測方法及系統(tǒng)。

背景技術(shù)

由于NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)是機(jī)體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，在免疫系統(tǒng)在的淋巴細(xì)胞中占比很大，NK細(xì)胞在形態(tài)上屬于大顆粒淋巴細(xì)胞，其在血液中或者淋巴液中的殺傷活力大，目前一般是通過流式細(xì)胞法對通過熒光劑染色后的NK細(xì)胞進(jìn)行篩選與計(jì)數(shù)，以熒光的亮度進(jìn)行測量細(xì)胞的量，但是其測量所需的時(shí)間漫長，精度低，目前針對NK細(xì)胞的活性或者殺傷性檢測一般通過加入靶細(xì)胞后用顯微鏡進(jìn)行人工檢測，難以客觀的判斷NK細(xì)胞的活性和殺傷力，無法量化，無法向診斷者提供最直接、清楚、及時(shí)和準(zhǔn)確的診斷圖像及意見，目前的NK細(xì)胞的計(jì)算機(jī)自動(dòng)識別方法，例如申請?zhí)朇N202011176203.8的一種體外自然殺傷細(xì)胞免疫活性的評價(jià)方法,對顯微圖像中同一區(qū)域的細(xì)胞進(jìn)行識別并分析，根據(jù)分析結(jié)果評估所述自然殺傷細(xì)胞的免疫活性，該方法由圖像直接得到細(xì)胞死亡率、細(xì)胞自傷率以及細(xì)胞特異殺傷率等多項(xiàng)數(shù)據(jù)；申請?zhí)朇N202011173498.3的一種基于細(xì)胞直徑評價(jià)細(xì)胞殺傷效力的方法通過圖像識別對所述顯微圖像中的細(xì)胞進(jìn)行識別，采集細(xì)胞的尺寸信息和顏色信息，并對所得信息進(jìn)行分析，根據(jù)分析結(jié)果對效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞殺傷效力進(jìn)行評價(jià)，這兩種方式在少量的NK細(xì)胞時(shí)效果尚佳，但是在大量的NK細(xì)胞同時(shí)分辨時(shí)，時(shí)間復(fù)雜度和空間復(fù)雜的劇增，檢測速度慢，并且精度很低，無法滿足快速、準(zhǔn)確檢測的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提出一種NK細(xì)胞活性快速檢測方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中所存在的一個(gè)或多個(gè)技術(shù)問題，至少提供一種有益的選擇或創(chuàng)造條件。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，根據(jù)本公開的一方面，提供一種NK細(xì)胞活性快速檢測方法，所述方法包括以下步驟：

S100，對免疫細(xì)胞樣本進(jìn)行染色；

進(jìn)一步地，在S100中，對免疫細(xì)胞樣本進(jìn)行染色的方法為：利用熒光染料對血液樣本進(jìn)行染色(增強(qiáng)細(xì)胞在圖像中的對比度)，并加入紅細(xì)胞裂解液或者溶血?jiǎng)┻M(jìn)行溶血去處紅細(xì)胞得到免疫細(xì)胞樣本，最終實(shí)現(xiàn)了對免疫細(xì)胞樣本進(jìn)行染色，所述熒光染料為DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)、異硫氰酸熒光素、增強(qiáng)型熒光蛋白、7-氨基放線菌素D中任意一種。

S200，在免疫細(xì)胞樣本中的任意一個(gè)位置滴入靶細(xì)胞液(一般為免疫細(xì)胞樣本的中心位置),記放入靶細(xì)胞液的中心位置為L點(diǎn)；

進(jìn)一步地，在S200中，所述靶細(xì)胞液中的靶細(xì)胞通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染使靶細(xì)胞特異性表達(dá)綠色熒光蛋白；靶細(xì)胞液的滴入量為免疫細(xì)胞樣本量的20分之一，例如免疫細(xì)胞樣本2ml，靶細(xì)胞液約為100μl。

進(jìn)一步地，在S200中，所述靶細(xì)胞液中的靶細(xì)胞包括：K-562細(xì)胞、海拉細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞、某些非自身組織細(xì)胞(如非自身的血細(xì)胞)、寄生蟲中任意一種。

S300，每間隔時(shí)間T采集免疫細(xì)胞樣本的顯微圖像或CCD圖像作為細(xì)胞活性圖像；其中，T的取值范圍為[10,300]秒；

其中，顯微圖像為通過光學(xué)顯微鏡拍攝的免疫細(xì)胞樣本表面圖像；

CCD圖像為通過面陣CCD工業(yè)相機(jī)采集的免疫細(xì)胞樣本表面的圖像。