[發(fā)明專利]一種檢測(cè)人體液中DHEA的含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110298486.1
• 申請(qǐng)日: 2021-03-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113063866A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡俊;吳建軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州倍樂(lè)勇生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/86;G01N30/88;G01N30/34
• 代理公司: 深圳得本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44762
• 代理人: 袁江龍

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)人體液中DHEA的含量的方法，包括高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)唾液中脫氫表雄酮：S1、在試劑盒中加入以下試劑，流動(dòng)相一、流動(dòng)相二、標(biāo)準(zhǔn)品母液、內(nèi)標(biāo)液、稀釋液、萃取液、質(zhì)控品和復(fù)溶溶劑；S2、采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)經(jīng)過(guò)前處理的唾液中脫氫表雄酮；S3、利用高效液相色譜將脫氫表雄酮與干擾物分離；S4、利用同位素內(nèi)標(biāo)法定量；S5、以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為Y軸；S6、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣本中脫氫表雄酮的含量。本發(fā)明方法靈敏度高，特異性好，唾液樣本處理較簡(jiǎn)單，方法學(xué)驗(yàn)證滿足要求，說(shuō)明該法是一種可靠的可用于人唾液中脫氫表雄酮的定量檢測(cè)方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)人體液中DHEA的含量的方法。

背景技術(shù)

脫氫表雄酮(DHEA)是由腎上腺皮質(zhì)分泌的一種甾體激素，是雄性激素和雌性激素合成的前體物質(zhì)，具有廣泛的生理和病理作用。DHEA被分泌至血液中大部分經(jīng)過(guò)代謝形成結(jié)合型DHEA，這些結(jié)合型DHEA生理活性較弱，而剩余的DHEA稱之為游離型DHEA，主要發(fā)揮生理活性的是這類DHEA。血液中游離型DHEA通過(guò)唾液腺上皮細(xì)胞被動(dòng)擴(kuò)散至唾液中，因此唾液中DHEA含量被認(rèn)為可以用于評(píng)估人體中游離DHEA的水平。

傳統(tǒng)的用于檢測(cè)DHEA的方法主要有酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光免疫分析法等，這些方法容易受到樣本中DHEA結(jié)構(gòu)類似物的干擾導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的偏離。近年來(lái)，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)被開(kāi)發(fā)應(yīng)用于檢測(cè)人體液中DHEA的含量，然而由于DHEA分子結(jié)構(gòu)原因，直接檢測(cè)會(huì)發(fā)現(xiàn)DHEA的電離效率不佳，加之其在唾液中含量很低，因此直接檢測(cè)的靈敏度達(dá)不到要求。

為此，我們提出一種檢測(cè)人體液中DHEA的含量的方法來(lái)解決上述問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)唾液中的DHEA不準(zhǔn)確的問(wèn)題，而提出的一種檢測(cè)人體液中DHEA的含量的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一種檢測(cè)人體液中DHEA的含量的方法，包括高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)唾液中脫氫表雄酮：

S1、在試劑盒中加入以下試劑，流動(dòng)相一、流動(dòng)相二、標(biāo)準(zhǔn)品母液、內(nèi)標(biāo)液、稀釋液、萃取液、質(zhì)控品和復(fù)溶溶劑；

S2、采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)經(jīng)過(guò)前處理的唾液中脫氫表雄酮；

S3、利用高效液相色譜將脫氫表雄酮與干擾物分離；

S4、利用同位素內(nèi)標(biāo)法定量；

S5、以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的濃度比為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為Y軸；

S6、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣本中脫氫表雄酮的含量。

優(yōu)選的，所述流動(dòng)相一為體積比為0.1％甲酸水溶液，所述流動(dòng)相二為色譜純的乙腈；

所述標(biāo)準(zhǔn)品母液為脫氫表雄酮的乙腈溶液，精確稱取10mg脫氫表雄酮標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解定容至10ml，得到1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品母液；

所述內(nèi)標(biāo)液為d6-脫氫表雄酮的乙腈溶液，精確稱取10mg d6-脫氫表雄酮標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解定容至10ml，得到1mg/ml內(nèi)標(biāo)母液。

所述稀釋液包括稀釋液一和稀釋液二，稀釋液1：空白唾液基質(zhì)溶液，將0.4g氯化鈉，0.4g氯化鉀，0.8g二水氯化鈣，0.8g二水磷酸二氫鈉，1g尿素，3g牛血清白蛋白用水溶解定容至1L制得，所述稀釋液二為乙腈；

所述萃取液為甲基叔丁基醚；