[發(fā)明專利]一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮種苗類型的引物組、方法、試劑盒及其應用

有效

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• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN113151543B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設計）人: 衛(wèi)尊征;周滌;王壹;王賢;熊敏
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎

本發(fā)明公開了一種利用SSR標記快速鑒定種苗期馬蹄蓮類型的引物組、方法、試劑盒及其應用。所述引物組包含引物對Zah27、Zah89和Zah102中的至少一種；所述引物對Zah27堿基序列如序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；所述引物對Zah89堿基序列如序列表中SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；所述引物對Zah102堿基序列如序列表中SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。本發(fā)明的方法具有操作簡單、檢測效率高等優(yōu)點，填補了當前馬蹄蓮屬內組間種苗早期鑒定技術缺失的空白，能夠有效打擊假冒種苗的銷售和傳播，保護馬蹄蓮種苗購買者的合法權益。

技術領域

本發(fā)明屬于分子標記技術，具體地，涉及一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮屬白色組和彩色組種苗的引物組、方法及試劑和試劑盒。

背景技術

馬蹄蓮(Zantedeschia)為原產于南非的天南星科(Araceae)，是多年生草本植物，全屬共7種2亞種，按其生活習性和特征分為白色和彩色兩個組。白色組的植株莖葉在冬季不落葉，花期從晚冬到晚春，耐寒性和抗病性強，適應范圍廣；但常見的僅一種，其佛焰苞花色單一僅為白色，即Z.aethiopica。而彩色組包括Z.elliottianna，Z.rehmannii，Z.albomaculata，Z.jucunda， Z.pentlandii等多個種或亞種；夏季開花，冬季落葉，經低溫休眠花芽分化后可在第二年繼續(xù)生長開花；與白色組相比，雖然彩色組耐寒耐熱性和抗病性較差，但因為它們更容易產生組內種間園藝雜交種(Z.hybrida)，變異類型更多，佛焰苞花色更豐富艷麗，具體包含紅、黃、粉、橙、紫多個色系，所以更受市場歡迎。目前國際國內市場上流行的商業(yè)馬蹄蓮品種主要來自于彩色組，據(jù)不完全統(tǒng)計，彩色組品種注冊數(shù)量已超過300個，較高的觀賞價值和廣闊的市場前景儼然使其躋身于高檔球根花卉之列。

購買利用組織培養(yǎng)技術生產的大批量脫毒種苗，是目前國內外栽培生產公司或機構實現(xiàn)馬蹄蓮商業(yè)種球快速供應的一個主要途徑。這主要是因為采用組培技術工廠化所生產的馬蹄蓮種苗，其植株長勢強，開花整齊，而且產花量高，具有能保持原品種的性狀、繁殖速度快和便于管理等優(yōu)點。但也存在一個重要問題，即組織培養(yǎng)過程中的白色組和彩色組馬蹄蓮的種質材料，在葉片形態(tài)上是無法區(qū)分和辨別的，而兩者最有效的區(qū)分方式為塊莖形態(tài)和佛焰苞顏色，但至少在組培苗移栽生長2年后才能觀察到。因為白色組馬蹄蓮的市場價值相對比較低廉，加上材料獲取容易且組培快繁系數(shù)大等優(yōu)勢，所以存在不良商家或個人故意用其冒充彩色組馬蹄蓮，從而達到以次充好混淆兩者的目的，極大的增加了馬蹄蓮栽培生產者的種植商業(yè)風險。因此，如何實現(xiàn)白色和彩色組馬蹄蓮苗期的早期鑒定就顯得格外重要。

白色組和彩色組馬蹄蓮之間存在著嚴重的生殖隔離，兩者通過雜交所獲得的后代因為核質基因組不兼容，會導致的胚乳敗育、質體發(fā)育不良及白化苗等問題，使其難以成活。進一步利用流式細胞儀對兩者代表種的基因組大小進行估測，發(fā)現(xiàn)它們存在明顯的區(qū)別，白色組馬蹄蓮Z.aethiopica和彩色組馬蹄蓮Z.elliottiana的核DNA含量分別約為3.72±0.10pg和1.17±0.50pg (DNA/2C)，基因組大小各相當于3.64Gbp和1.15Gbp。考慮到兩者基因組差異較大，若能尋找到兩者共有的且具有差異的基因組來源的核酸序列，并開發(fā)出重現(xiàn)性好和特異性強的分子標記，比如一般由2～6個核苷酸為重復單位組成的串聯(lián)重復SSR標記，有助于解決白色組和彩色組馬蹄蓮的早期檢測問題，也勢必將對馬蹄蓮屬兩個組未來新品種的選育和保護起到重要輔助作用。

發(fā)明內容

為解決當前白色組和彩色組馬蹄蓮苗期種質鑒定方法不足的問題，本發(fā)明目的在于提供了一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮種苗類型的引物組、方法、試劑盒及其應用。基于馬蹄蓮屬白色組和彩色組之間多個種(品種)共有轉錄組拼接序列所開發(fā)的SSR引物組及鑒定方法，可有效滿足當前市場對兩個馬蹄蓮組間種苗的早期商業(yè)鑒定要求。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案：