[發明專利]一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮種苗類型的引物組、方法、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202110296979.1
• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN113151543B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 衛尊征;周滌;王壹;王賢;熊敏
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎

1.一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮種苗類型的引物組，所述鑒定馬蹄蓮種苗類型是指在馬蹄蓮種苗期區分其屬于白色組馬蹄蓮或彩色組馬蹄蓮，其特征在于，所述引物組包含引物對Zah27、Zah89和Zah102中的至少一種；

所述引物對Zah27的正向引物的堿基序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，反向引物的堿基序列如序列表中SEQ ID NO：2所示；

所述引物對Zah89的正向引物的堿基序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，反向引物的堿基序列如序列表中SEQ ID NO：4所示；

所述引物對Zah102的正向引物的堿基序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，反向引物的堿基序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。

2.一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮種苗類型的方法，所述鑒定馬蹄蓮種苗類型是指在馬蹄蓮種苗期區分馬蹄蓮來源為白色組或彩色組，其特征在于，所述方法包含以下步驟：

S1、提取待測馬蹄蓮的基因組DNA；

S2、以待測馬蹄蓮的基因組DNA為模板，用權利要求1所述的引物組中的任一或多種引物對進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；

S3、檢測所述PCR擴增產物，并根據所述PCR擴增產物的帶型進行鑒定，以確定所述待測馬蹄蓮類型是來源于白色組或彩色組；

所述鑒定按照如下方法進行：

采用引物對Zah27進行PCR擴增時，經電泳后，當PCR擴增產物是分子量大小為120bp的條帶和/或110bp的條帶時，待測馬蹄蓮來源于白色組；當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為130bp時，待測馬蹄蓮來源于彩色組；

采用引物對Zah89進行PCR擴增時，經電泳后，當PCR擴增產物是分子量大小為147bp的條帶和/或153bp的條帶時，待測馬蹄蓮來源于白色組；當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為160bp時，待測馬蹄蓮來源于彩色組；

采用引物對Zah102進行PCR擴增時，當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為190bp時，待測馬蹄蓮來源于白色組；當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為177bp時，待測馬蹄蓮來源于彩色組。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的體系按12.5μL計為：10ng/μL所述模板 2.0μL，10×Buffer 1.25μL，2.5mM dNTPs 0.25μL，10μM正向引物0.4μL，10μM反向引物0.4μL，Taq DNA聚合酶0.2μL，ddH₂O 8.0μL。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：94℃預變性5min；94℃變性45s，52-58℃退火40s，72℃延伸60s，共30個循環；72℃延伸10min，4℃保存。

5.一種利用SSR標記快速鑒定馬蹄蓮種苗類型的試劑盒，所述鑒定馬蹄蓮種苗類型是指在馬蹄蓮種苗期區分馬蹄蓮來源為白色組或彩色組，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1所述的引物組。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述引物組中，正向引物和反向引物的摩爾比為1:1。

7.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括DNA聚合酶和/或dNTPs。

8.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR緩沖液。

9.權利要求1所述的引物組或權利要求2-4任一項所述的方法或者所述權利要求5-8任一項所述的試劑盒在馬蹄蓮種苗類型鑒定方面的應用；

所述類型鑒定是指在馬蹄蓮種苗期區分馬蹄蓮來源于白色組或彩色組；

所述鑒定按照如下方法進行：

采用引物對Zah27進行PCR擴增時，經電泳后，當PCR擴增產物是分子量大小為120bp的條帶和/或110bp的條帶時，待測馬蹄蓮來源于白色組；當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為130bp時，待測馬蹄蓮來源于彩色組；

采用引物對Zah89進行PCR擴增時，經電泳后，當PCR擴增產物是分子量大小為147bp的條帶和/或153bp的條帶時，待測馬蹄蓮來源于白色組；當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為160bp時，待測馬蹄蓮來源于彩色組；

采用引物對Zah102進行PCR擴增時，當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為190bp時，待測馬蹄蓮來源于白色組；當PCR擴增產物是一條電泳條帶且分子量大小為177bp時，待測馬蹄蓮來源于彩色組。