[發明專利]一種基于固相分散萃取結合超高效液相色譜法同時檢測何首烏中5種蒽醌類化合物的方法

在審

• 申請號: 202110293723.5
• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN113075312A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 萬益群;徐穎;郭嵐;劉翻
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/64;G01N30/86
• 代理公司: 南昌恒橋知識產權代理事務所(普通合伙) 36125
• 代理人: 楊志宇

1.一種基于固相分散萃取結合超高效液相色譜法同時檢測何首烏中5種蒽醌類化合物的方法，其特征在于：主要包括以下幾個步驟；

（1）液相色譜條件；

（2）5種蒽醌類化合物的同時檢測；

（3）樣品的前處理；

（4）樣品的檢測。

2.一種基于固相分散萃取結合超高效液相色譜法同時檢測何首烏中5種蒽醌類化合物的方法，其特征在于：主要包括以下幾個步驟：

（1）液相色譜條件：

本發明中所使用的儀器是Acquity UPLC H-Class Plus超高效液相色譜儀（美國waters公司），配有Acquity四元梯度泵、Acquity FTN自動進樣器、Acquity柱溫箱和Acquity FDA二極管陣列檢測器；色譜條件：色譜柱：ACQUITY UPLC ? HSS T3分析柱（2.1mm×100 mm×1.8 μm）；柱溫：35℃；進樣體積：5μL；流動相：A相為水（含0.1%甲酸），B相為乙腈（含0.1%甲酸）；梯度洗脫程序：0~1 min，45% B；1~10min，70% B；10~13min，90% B；13.1 min，45%B；保持2 min；流速：0.4 mL/min；檢測波長：254 nm；

（2）5種蒽醌類化合物的同時檢測：

配制一系列質量濃度的5種蒽醌類化合物混合標準溶液，在上述液相色譜條件下進行測定，以各組分峰面積Y對質量濃度X進行線性回歸，得到線性回歸方程；大黃素（0.5-100mg/L）、大黃素甲醚（0.5-40 mg/L）、大黃酚（0.1-20 mg/L）、大黃酸（0.1-20 mg/L）、蘆薈大黃素（0.1-20 mg/L）線性關系良好（R20.9964）；5種目標分析物的檢出限（LOD）和定量限（LOQ）分別在0.01~0.07 mg/L和0.04~0.28 mg/L范圍內；

（3）樣品前處理：稱取0.5 g（精確至0.001 g）的何首烏樣品，加入30 mL的70%甲醇，超聲提取30min，5000 rpm離心5 min，取上層清液，加水稀釋使甲醇含量為50%；取5mL上述提取液，加入0.6 g C18吸附材料，旋渦振蕩吸附10 min，10000 rpm離心10 min，收集C18材料，上清液再用C18材料重復上述吸附步驟2次；合并3次所用的C18材料，用20 mL的乙腈超聲洗脫30min，10000 rpm離心10 min，取出上清液，用氮氣吹干，殘余物用0.5 mL甲醇復溶，過0.22 μm濾膜，供UPLC-DAD分析；

（4）樣品檢測：取0.5 g樣品，分別添加高、中、低三個不同水平的蒽醌類化合物混合標準溶液，按上述樣品前處理方法對樣品進行處理后，進行UPLC-DAD分析，計算樣品加標回收率。