[發(fā)明專利]5-氨基乙酰丙酸合成酶突變體及其宿主細(xì)胞和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110293111.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-08
• 公開（公告）號(hào): CN112831483B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭平;趙晶;譚子瑊;陳久洲;饒德明;孫際賓;馬延和
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19;C12R1/15
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

1.一種ALA合成酶，其特征在于：

(a) 所述ALA合成酶的氨基酸序列在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸殘基為賴氨酸，或者第365位的氨基酸殘基為賴氨酸并且第40位的氨基酸殘基為甘氨酸；

或

(b) 所述ALA合成酶的氨基酸序列在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸殘基為賴氨酸，并且第29位的氨基酸殘基為精氨酸或第44位為脯氨酸或第75位為丙氨酸。

2.權(quán)利要求1所述的ALA合成酶的編碼核酸分子。

3.包含權(quán)利要求1所述的ALA合成酶編碼核酸分子的表達(dá)載體。

4.一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求1所述的ALA合成酶，

所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium glutamicum)、球形紅細(xì)菌(Rhodobacter sphaeroides)、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。

5.如權(quán)利要求4所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌或谷氨酸棒狀桿菌。

6.權(quán)利要求1所述的ALA合成酶、或權(quán)利要求2所述的編碼核酸分子、或權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體、或權(quán)利要求4或5所述的宿主細(xì)胞在生產(chǎn)ALA中的應(yīng)用。

7. 一種制備ALA的方法，所述方法包括以下步驟：

a. 培養(yǎng)權(quán)利要求4或5所述的宿主細(xì)胞，使之產(chǎn)生ALA；和

b. 任選從培養(yǎng)液中分離步驟a產(chǎn)生的ALA。

8. 一種制備ALA的方法，所述方法包括以下步驟：

a. 利用權(quán)利要求1所述的ALA合成酶，催化合成ALA；和

b. 任選從以上反應(yīng)體系中分離ALA。

9.權(quán)利要求1所述的ALA合成酶的制備方法，所述方法包括以下步驟：

a. 得到權(quán)利要求1所述的ALA合成酶的編碼序列；

b. 將a得到的編碼序列直接轉(zhuǎn)染合適的宿主細(xì)胞或經(jīng)載體引入合適的宿主細(xì)胞；

c. 培養(yǎng)b得到的宿主細(xì)胞；

d. 從步驟c得到的培養(yǎng)體系中分離所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生的ALA合成酶。

10. 改造ALA合成酶以便提高其活性的方法，所述方法包括以下步驟：

a. 將待改造的ALA合成酶的氨基酸序列與SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列作比對(duì)；和

b. 改造所述待改造ALA合成酶的編碼序列，使得編碼的氨基酸序列中對(duì)應(yīng)于SEQ IDNO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸殘基為賴氨酸，或者第365位的氨基酸殘基為賴氨酸并且第40位的氨基酸殘基為甘氨酸；

或

對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸殘基為賴氨酸，并且第29位的氨基酸殘基為精氨酸或第44位為脯氨酸或第75位為丙氨酸；

c. 將b得到的編碼序列直接轉(zhuǎn)染合適的宿主細(xì)胞或經(jīng)載體引入合適的宿主細(xì)胞；

d. 培養(yǎng)c得到的宿主細(xì)胞；和

e. 從步驟d得到的培養(yǎng)體系中分離所述宿主細(xì)胞產(chǎn)生的ALA合成酶。