[發明專利]用于高效誘導擴增人體外周血殺傷性免疫細胞的組合物、試劑盒以及該免疫細胞的培養方法

在審

• 申請號: 202110291770.6
• 申請日: 2021-03-18
• 公開（公告）號: CN113046313A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 李偉強;邵文陶
• 申請（專利權）人: 重慶福美干細胞生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所(普通合伙) 50211
• 代理人: 郭麗;郭云

本發明公開一種用于高效誘導擴增人體外周血殺傷性免疫細胞的組合物、試劑盒以及該免疫細胞的培養方法，該組合物包括白細胞介素?1β、白細胞介素?6、前列腺素E2、干擾素γ、CD3單抗、CD28單抗、白細胞介素?2、腫瘤壞死因子?α、粒細胞巨噬細胞刺激因子、白細胞介素?1α、白細胞介素?4以及PD?1抗體或者CTLA?4抗體。本發明提供的組合物可以有效的提高殺傷性T自體免疫細胞的增殖能力及其殺傷腫瘤細胞能力。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及一種用于高效誘導擴增人體外周血殺傷性免疫細胞的組合物、試劑盒以及該免疫細胞的培養方法。

背景技術

免疫系統(Immune System)在機體內執行免疫應答及免疫功能，由免疫器官、免疫細胞和免疫分子組成。免疫系統識別和排除抗原性異物、與機體其他系統相互協調，共同維持機體內環境穩定和生理平衡。

胸腺依賴淋巴細胞(Thymus dependent lymphocyte)，可簡稱T細胞，是一種免疫細胞，主要包括殺傷性T細胞和記憶性T細胞。成熟的T細胞經血液分布到外周免疫器官，可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環，發揮細胞免疫及免疫調節等功能。殺傷性T細胞(也稱效應T細胞)是經過抗原(或抗原呈遞細胞Antigen-presenting cells,APC)呈遞特異性殺傷腫瘤的一種免疫細胞，其比例直接決定了腫瘤殺傷效果。抗原呈遞細胞(APC)是指能夠攝取、加工處理抗原，并將處理過的抗原呈遞給T、B淋巴細胞的一類免疫細胞。APC細胞主要包括單核-吞噬細胞、樹突狀細胞、B細胞以及內皮細胞、腫瘤細胞的病毒感染的靶細胞等，其中樹突狀細胞(Dendritic Cells，簡稱DC)的抗原呈遞能力最強。DC細胞因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名，是目前發現的抗原遞呈功能最強的細胞。據相關報道，DC是唯一能夠顯著刺激初始T細胞增殖的抗原呈遞細胞，而其它APC(如單核巨噬細胞，B細胞等)僅能刺激已活化的或記憶性的T細胞。DC是機體適應性T細胞免疫應答的始動者，在細胞免疫研究中具有非常重要的作用。

隨著細胞免疫技術的日漸成熟發展，由此衍生出CIK(Cytokine-Induced KillerCells，細胞因子誘導殺傷性細胞)、NK(natural killer，自然殺傷細胞)和NKT(naturalkiller T，自然殺傷T細胞)等免疫細胞，以上免疫細胞來源于外周血的體外培養技術，且其腫瘤殺傷效果各不相同。CIK細胞是單個核細胞在CD3單抗和多種細胞因子(包括IFN-γ,IL-2等)的作用下培養獲得的一群以CD3+、CD56+細胞為主要效應殺傷細胞的細胞群，其既有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性，同時兼顧NK細胞(主要以CD3-、CD56+細胞為主)的非MHC(主要組織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。CIK細胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣、正常組織毒性低和體外易擴增等特點，是目前廣泛科學研究及臨床應用較多的免疫治療方案。

然而，目前CIK細胞體外擴增培養穩定性、一致性及細胞表型表達率一般，同時針對實體瘤的殺傷效果不好，NK免疫細胞屬于廣譜型的殺傷，針對性不足。故急需一種針對性較強且腫瘤殺傷功能增強型的免疫細胞，來突破細胞免疫技術的瓶頸。研究者們采用DC-CIK細胞技術，DC-CIK即DC細胞和CIK細胞在體外共同孵育培養得到的細胞群。DC與CIK具有協同作用，共同孵育后，DC表面共刺激分子的表達及抗原遞呈能力均明顯提高，而CIK的增殖能力和體內外細胞毒活性也得以增強，因此DC-CIK較單獨的CIK治療更為有效。若將腫瘤抗原負載的DC與CIK共培養，可刺激產生腫瘤抗原特異性的T細胞，這樣的DC-CIK治療則兼具特異性和非特異性雙重腫瘤殺傷作用，比未負載腫瘤抗原的DC刺激活化的CIK活性更強，常被用于臨床實驗和科研研究。

T淋巴細胞的激活主要依靠兩個信號通路共同作用：

(1)TCR(T細胞受體)與其他抗原識別結合，而抗原主要由APCs(DC抗原遞呈細胞)上的主要抗原肽復合物MHC呈遞；