[發明專利]一種具有清除細胞內活性氧自由基作用的脂質納米乳劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202110290875.X
• 申請日: 2021-03-18
• 公開（公告）號: CN113017091A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 潘南;劉智禹;吳靖娜;蔡水淋;陳曉婷;李毅;李穎
• 申請（專利權）人: 福建省水產研究所(福建水產病害防治中心）
• 主分類號: A23L33/115
• 分類號: A23L33/115;A23L29/10
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明涉及一種具有清除細胞內活性氧自由基作用的脂質納米乳劑的制備方法，包括以下步驟：乳化劑配制、海膽黃脂質乳劑制備、海膽黃脂質納米乳劑制備。所述海膽黃脂質的制備方法包括海膽黃真空冷凍干燥、超聲輔助有機溶劑提取、離心濃縮等步驟。本發明涉及的海膽黃脂質納米乳劑及其細胞內抗氧化模型，與油脂醇提物的傳統化學模型或細胞內抗氧化模型相比，更能精準反應油脂在體內清除活性氧自由基的功效；且本發明涉及的海膽黃脂質納米乳劑的制備方法綠色安全、操作簡單、無需化學交聯與構造，制備得到的海膽黃脂質納米乳劑的納米顆粒粒徑可控，具有較好的理化穩定性、生物安全性和較顯著的清除細胞內活性氧自由基的功效。

技術領域

本發明屬于食品營養與納米材料技術領域，具體涉及一種具有清除細胞內活性氧自由基作用的脂質納米乳劑及其制備方法。

背景技術

脂質是有機體賴以生存的重要營養元素之一，其為機體提供所需能量以外，與許多疾病的發生與發展密切相關，在維持有機體穩態、健康等方面發揮著關鍵作用。

海膽黃為海膽性腺，是一種深受美食饕客追捧的健康食材。其脂質約占總重的10～30%（干基），包含脂肪酸、甘油酯、磷脂、固醇脂、異戊烯醇酯、糖脂及脂溶性微量生物活性物質等，賦予了海膽黃鮮醇甜潤的口感，并有益于維持機體健康穩態。然而由于富含共軛、非共軛不飽和鍵，在高溫、高濕、光照、酶、金屬、微生物等催化條件下，海膽黃脂質容易發生氧化、降解、異構等反應，導致品質惡化及生物活性物質的損失等。因此，海膽黃脂質的加工及其抗氧化活性的測定成為食品生產商和科研人員面臨的難題之一。

目前油脂抗氧化活性評估主要以體外化學模型為主，通過測量油脂醇提物清除合成自由基或天然自由基的相對能力，包括清除DPPH（2,2-二苯基-1-苦味酸自由基）、ABTS（3-乙基苯并噻唑啉磺酸自由基）、FRAP（鐵還原抗氧化能力）、TRAP（總自由基捕獲抗氧化參數）等，進而與標準抗氧化化合物的抗氧化能力進行比較。

由于化學模型無法充分模擬人體復雜的反應體系（如溫度、pH值、微生物等），近年來，基于人肝癌細胞HepG-2的細胞抗氧化活性（Cellular Antioxidant Activity，CAA）模型較傳統化學模型更具有生物相關性，較動物模型等更經濟、便捷，更好地反應了抗氧化劑在細胞中的攝取、吸收與代謝的情況，成為抗氧化活性評估的熱門方法之一。

然而，化學模型或CAA模型的反應底物常為水溶性或醇溶性化學物質，而與活性氧自由基、疾病發生密切相關的醇不溶脂質及微量生物活性物質的抗氧化活性無法得到充分體現。因此，亟需一種較適當、全面的檢測脂質氧化程度的模型，以更精準地反應脂質抗氧化活性。

目前國內外關于海膽黃的研究主要集中在單一化學物質，如海膽黃多糖、多肽的分離純化、免疫活性及其產品（包括即食海膽、口服液、護膚品）等方面，如專利CN201510574046.9、CN201310248186.8、CN201010525618.1、CN200810011855，而關于海膽黃脂質、脂溶性微量生物活性物質、微流化納米乳劑制備及其清除細胞內活性氧自由基功效的研究尚未有報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種具有清除細胞內活性氧自由基作用的脂質納米乳劑及其制備方法，本發明要解決的技術問題包括：

基于微流化技術的納米乳劑（d200 nm）是脂質及脂溶性活性物質的良好運輸載體。本發明以海膽黃脂質為原料，以天然食源蛋白為乳化劑，采用微流化高壓均質技術獲得一種海膽黃脂質納米乳劑，建立了脂質納米乳劑的細胞內抗氧化模型，運用熒光動力學法監測活性氧自由基鏈式反應的發生過程，更全面地獲得了海膽黃脂質抗氧化活性成分在細胞內的生物利用率、吸收與代謝的情況。本發明采用超聲、高速混合、高速撞擊、強剪切速率和流體動力空化等高壓均質方法，有效增強了海膽黃脂質及脂溶性活性物質的水分散系數、穩定性、感官特性及生物利用度。與油脂醇提物的傳統化學模型或細胞內抗氧化模型相比，基于微流化納米制劑技術的細胞內抗氧化模型，更精確地驗證了海膽黃脂質及其納米乳劑在體內清除活性氧自由基的功效與安全性。