[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒檢測方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110290165.7
• 申請(qǐng)日: 2021-03-18
• 公開（公告）號(hào): CN113030469A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王文智;路瑤;黃煒;劉昆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州省分析測試研究院;杭州晶佰生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 貴陽貴知知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 52115
• 代理人: 曾香蘭;蔣琳琳

1.一種新型冠狀病毒檢測方法，其特征在于所述檢測方法包括以下步驟：(1)抗體儲(chǔ)備緩沖液置換為磁珠連接緩沖液；(2)磁珠的準(zhǔn)備；(3)抗體標(biāo)記生物素biotin；(4)標(biāo)準(zhǔn)品的配置；(5)上機(jī)分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述(1)抗體儲(chǔ)備緩沖液置換為磁珠連接緩沖液步驟為：

1)用超微量分光光度計(jì)分別測定MM05抗體和R001抗體的濃度，根據(jù)包被抗體要求的量100μg及測得的抗體濃度計(jì)算每個(gè)抗體需要的體積；

2)將所需體積的MM05抗體和R001抗體分別于過濾器中，分別加入磁珠連接緩沖液至450-550μl，并放入離心機(jī)，離心3-8min，棄掉底部液體，再重復(fù)以上的洗滌步驟兩次，每次加400-500μl磁珠連接緩沖液，將過濾器倒置放入干凈的離心管中，離心1-3min，收集液體；

3)再加入45-55μl磁珠連接緩沖液洗滌濾膜4-8次，將步驟2)中的過濾器倒置在離心管中，離心1-3min，收集液體；

4)取制得的R001抗體150μl體積，MM05抗體300μl體積放于冰上保存?zhèn)溆谩?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述(1)抗體儲(chǔ)備緩沖液的置換為磁珠連接緩沖液步驟為：

1)用超微量分光光度計(jì)分別測定MM05抗體和R001抗體的濃度，根據(jù)包被抗體要求的量100μg及測得的抗體濃度計(jì)算每個(gè)抗體需要的體積；

2)將所需體積的MM05抗體和R001抗體分別于過濾器中，分別加入磁珠連接緩沖液至500μl，并放入離心機(jī)，離心5min，棄掉底部液體，再重復(fù)以上的洗滌步驟兩次，每次加450μl磁珠連接緩沖液，將過濾器倒置放入干凈的離心管中，離心2min，收集液體；

3)再加入50μl磁珠連接緩沖液洗滌濾膜6次，將步驟2)中的過濾器倒置在離心管中，離心2min，收集液體；

4)取制得的R001抗體150μl體積，MM05抗體300μl體積放于冰上保存?zhèn)溆谩?/p>

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述(2)磁珠的準(zhǔn)備步驟為：

1)磁珠的洗滌：取震蕩30s以上的置換后磁珠貯備液0.13ml于離心管中，快速離心，吸棄上清液；再加入250-350μl磁珠清洗緩沖液，渦旋振蕩3-8s，快速離心，吸棄上清液，再重復(fù)磁珠洗滌步驟兩次，吸棄上清液，即得緩沖液洗滌后的磁珠；

2)磁珠的轉(zhuǎn)換：加入250-350μl磁珠連接緩沖液于緩沖液洗滌后的磁珠中，渦旋振蕩3-8s，快速離心，吸棄上清液，再重復(fù)磁珠置換步驟兩次，快速離心，吸棄上清液，加入291μl磁珠連接緩沖液，渦旋振蕩3-8s，快速離心并放置于冰上，即得緩沖液置換后的磁珠；

3)將預(yù)冷的1ml磁珠連接緩沖液加入含有10mg EDC的小瓶中，渦旋5-10s，取9μl加入緩沖液置換后的磁珠中，渦旋震蕩混合8-12s，將離心管于2-8℃混合孵育25-35min，快速離心，吸棄上清，分別加入300μl置換后的抗體MM05溶液和150μl置換后的抗體R001溶液，渦旋振蕩8-12s，將離心管于2-8℃混合孵育1.5-2.5h，快速離心，吸棄上清液，加入300μl磁珠清洗緩沖液，渦旋振蕩3-8s，快速離心，吸棄上清液，再重復(fù)一次磁珠洗滌步驟，加入300μl磁珠封閉緩沖液，渦旋振蕩3-8s，室溫孵育40-50min，快速離心，吸棄上清液，加入300μl磁珠清洗緩沖液，渦旋振蕩3-8s，快速離心，吸棄上清液，加入300μl磁珠稀釋液，渦旋振蕩3-8s，快速離心，即得偶聯(lián)抗體的磁珠Beads-MM05溶液，放3-5℃下保存。