[發明專利]一種用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基、配制方法及應用在審
| 申請號： | 202110286083.5 | 申請日： | 2021-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN112852703A | 公開（公告）日： | 2021-05-28 |
| 發明（設計）人： | 李銀生;吳宜釗;邱江平 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N1/38;C12P21/02;C12R1/125 |
| 代理公司： | 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236 | 代理人： | 胡晶 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 提高 枯草 芽孢 桿菌 重組 蛋白 表達 培養基 配制 方法 應用 | ||
1.一種用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基，其特征在于，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：玉米浸粉25-35g，豆粕提取物36-48g，麥芽糖40-60g，氯化鉀4-6g，硫酸銨3-5g，硫酸錳0.075-0.125g，氯化鈣0.075-0.125g，余量為去離子水。
2.根據權利要求1所述的一種用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基，其特征在于，所述培養基的每1000mL體系中，培養基組成包括：玉米浸粉30g，豆粕提取物42g，麥芽糖50g，氯化鉀5g，硫酸銨4g，硫酸錳0.1g，氯化鈣0.1g，余量為去離子水。
3.根據權利要求1所述的一種用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基，其特征在于，所述麥芽糖先用去離子水配制成50％(W/V)的麥芽糖溶液，所述硫酸錳先用去離子水配制成10g/L的硫酸錳溶液，所述氯化鈣先用去離子水配制成10g/L的氯化鈣溶液。
4.一種如權利要求1所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的配制方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、稱取25-35g玉米浸粉、36-48g豆粕提取物、4-6g氯化鉀、3-5g硫酸銨，加入800ml去離子水溶解，用氫氧化鈉溶液調整pH到6-8，高壓滅菌，得到基礎培養液YD；
S2、稱取125g麥芽糖，加入200mL去離子水溶解后定容至250mL，高壓滅菌，得到50％(W/V)的麥芽糖溶液；
S3、稱取1g硫酸錳，加入60mL去離子水溶解后定容至100mL，高壓滅菌，得到10g/L的硫酸錳溶液；
S4、稱取1g氯化鈣，加入60mL去離子水溶解后定容至100mL，高壓滅菌，得到10g/L的氯化鈣溶液；
S5、在步驟S1中所配制的基礎培養液YD中，緩慢加入80-120mL的50％(W/V)的麥芽糖溶液，7.5-1.25ml 10g/L的硫酸錳溶液、7.5-1.25mL 10g/L的氯化鈣溶液，用滅菌去離子水定容至1 000mL得到用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基。
5.根據權利要求4所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的配制方法，其特征在于，步驟S5中，添加抗生素，用于篩選重組子或提供選擇壓力。
6.一種如權利要求1所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的應用，其特征在于，將用于表達重組蛋白的枯草芽孢桿菌，接種至權利要求1所述的培養基中，28-36℃培養30-42h，然后將菌液離心取上清液，純化后得到重組蛋白表達量提高的菌液。
7.根據權利要求6所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的應用，其特征在于，用于表達重組蛋白的枯草芽孢桿菌中，表達所用的啟動子為改進型麥芽糖操縱元啟動子Pglv-M1，其序列如SEQ ID NO：1所示。
8.根據權利要求6所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的應用，其特征在于，用于表達重組蛋白的枯草芽孢桿菌接種前，先在LB培養基中活化過夜。
9.根據權利要求6所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的應用，其特征在于，表達的重組蛋白為可溶性重組蛋白。
10.根據權利要求6所述的用于提高枯草芽孢桿菌中重組蛋白表達量的培養基的應用，其特征在于，用于表達重組蛋白的菌株為枯草芽孢桿菌WB800N。
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