[發明專利]一種基于拉曼光譜法的miRNA的高靈敏度檢測方法

在審

• 申請號: 202110285828.6
• 申請日: 2021-03-17
• 公開（公告）號: CN113075191A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 金永龍;殷古軒;繆雨揚;許田;王超男;許美鳳
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 許潔

1.一種基于拉曼光譜法的miRNA的高靈敏度檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟一、確定目標miRNA(1)并制備相應的一端巰基化的互補DNA(2)；

步驟二、制備金納米顆粒AuNP(3)，通過巰基與金的作用把互補DNA(2)與金納米顆粒AuNP(3)連接，得到連接了目標miRNA對應互補DNA的金納米顆粒DNA-AuNP(5)；

步驟三、給目標miRNA修飾生物素(4)；

步驟四、利用生物素(4)與鏈霉親和素(6)的作用，把修飾了生物素(4)的目標miRNA(1)與表面修飾鏈霉親和素的磁珠BB-SA(8)連接；

步驟五、將金納米顆粒DNA-AuNP(5)溶液與連接了目標miRNA(1)的磁珠BB-SA(8)溶液混合，使得互補DNA(2)與目標miRNA(1)互補配對連接，得到連接了目標miRNA(1)并結合了互補DNA的金納米顆粒DNA-AuNP(5)的磁珠BB-miR-DNA-AuNP(9)；

步驟六、利用磁珠(7)的磁性，用磁分離技術分離出磁珠BB-miR-DNA-AuNP(9)；

步驟七、將磁珠BB-miR-DNA-AuNP(9)與拉曼探針分子(10)溶液混合，測量其拉曼信號；雖然目標miRNA(1)的濃度很低，但AuNP(3)增強的是高濃度拉曼探針分子(10)的拉曼信號，因此起到了對目標miRNA(1)信號的放大作用；由于DNA-AuNPs(3)只與目標miRNA(1)互補特異性連接，增強拉曼信號的強弱直接反應了目標miRNA(1)的濃度；

步驟八、制作增強拉曼信號與目標miRNA(1)的濃度關系標準曲線；

步驟九、通過增強拉曼信號確定目標miRNA(1)的濃度。

2.根據權利要求1所述的基于拉曼光譜法的miRNA的高靈敏度檢測方法，其特征在于：所述的金納米顆粒(AuNP)(3)的尺寸為30-120nm。

3.根據權利要求1所述的基于拉曼光譜法的miRNA的高靈敏度檢測方法，其特征在于：所述的拉曼探針分子(10)是拉曼活性較強的有機分子。

4.根據權利要求3所述的基于拉曼光譜法的miRNA的高靈敏度檢測方法，其特征在于：所述的拉曼探針分子(10)是結晶紫、羅丹明或者苯硫酚。